BmNPV的iap2基因的克隆、序列分析及其對哺乳動物細胞凋亡的作用.pdf

1、目的：探討B(tài)mNPV-iap2基因對哺乳動物細胞Hela，PC12細胞凋亡作用以及是否會對帕金森病產生的影響。 實驗方法：克隆了浙江BmNPV的iap2基因，它與鎮(zhèn)江BmNPV的iap2基因、BmNPV－T3的iap2、AcNPV的iap2、RmNPV的iap2相比較具有很高的同源性。并且根據哺乳動物常用的表達載體pcDNA3.1(+)的要求設計了引物，通過PCR擴增得到了抗細胞凋亡基因iap2的DNA片段。將擴增產物克隆到pG

2、EM－T－easy載體上,再進一步將插入片段酶切并連接到表達載體pcDNA3.1(+)上。構建pcDNA3.1(+)-iap2表達載體，再用類似的方法構建pcDNA3.1(+)-EGFP載體。 重組真核表達質粒pcDNA3.1(+)-iap2加pcDNA3.1(+)-EGFP載體共轉染的Hela細胞命名為Hela-pcDNAiap2（實驗組）。真核表達質粒pcDNA3.1(+)加pcDNA3.1(+)-EGFP的載體共轉染的He

3、la細胞命名為Hela-pcDNA（對照組）。真核表達質粒pcDNA3.1(+)加pcDNA3.1(+)-EGFP的載體共轉染的PC12細胞命名為PC12-pcDNA（對照組）。pcDNA3.1(+)-iap2加pcDNA3.1(+)-EGFP載體共轉染的細胞命名為PC12-pcDNAiap2（實驗組）。親本細胞PC12作為未轉染（空白組）對照。利用一種共轉染的方法用脂質體將包含BmNPV-iap2的外源基因轉染進哺乳動物細胞中，G41