白藜蘆醇對(duì)脊髓損傷大鼠脊髓及遠(yuǎn)隔臟器的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究白藜蘆醇（Resveratrol，RES）對(duì)于脊髓損傷后脊髓以及遠(yuǎn)隔臟器（包括肺臟，腎臟，肝臟）的保護(hù)作用及機(jī)制，為脊髓損傷后的臨床藥物治療及并發(fā)癥的控制，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用改良Allen's法，建立大鼠脊髓鈍挫傷模型(T10)。實(shí)驗(yàn)第一部分，重點(diǎn)關(guān)注白藜蘆醇對(duì)于脊髓損傷后脊髓的保護(hù)作用及機(jī)制我們進(jìn)行了為期3個(gè)月的觀察研究。我們將SD大鼠被隨機(jī)分成4組:未損傷組，假手術(shù)組，脊髓損傷模型組和白脊髓損傷十藜蘆醇組

2、，每組隨機(jī)分配大鼠24只。在脊髓損傷十白藜蘆醇組的大鼠，行脊髓損傷術(shù)后，即刻按照50mg/kg的劑量，腹腔注射白藜蘆醇，給藥頻率為每隔24小時(shí)給藥一次，連續(xù)給藥3次。在1天，3天，1周，2周，1月以及3月這6個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行BBB功能評(píng)分、下肢熱疼痛回縮實(shí)驗(yàn)、神經(jīng)電生理檢測(cè)和磁共振檢查四個(gè)方面進(jìn)行觀察。研究發(fā)現(xiàn)，脊髓損傷大鼠在應(yīng)用白藜蘆醇后，遠(yuǎn)期功能和檢查，包括BBB評(píng)分，熱痛覺(jué)反應(yīng)時(shí)間，電生理檢測(cè)以及MRI檢查方面都得到了很大改善。我們采

3、用WB方法、ELISA方法等方法，對(duì)脊髓損傷后SIRT1的表達(dá)，以及炎癥因子、自噬、凋亡相關(guān)情況進(jìn)行檢測(cè)。
　　另外，在實(shí)驗(yàn)二中我們采用老年大鼠，研究脊髓損傷后遠(yuǎn)隔臟器的損傷情況，以及白藜蘆醇對(duì)其保護(hù)作用。SD老年大鼠被隨機(jī)分成4組:未損傷組（n=16只），模型組(n=16只)，溶媒組(n=16只)，白藜蘆醇組（n=16只）。脊髓損傷十白藜蘆醇組，行脊髓損傷術(shù)后，即刻按照50mg/kg的劑量，腹腔注射白藜蘆醇。在12h，24h，7

4、2h以及7天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè)，肺泡灌洗液中炎癥因子及肝腎功能進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)于不同組動(dòng)物的肺臟、腎臟、肝臟組織勻漿進(jìn)行SIRT1的表達(dá)的檢測(cè)、同步檢測(cè)炎癥因子的變化情況，以及對(duì)細(xì)胞自噬和凋亡的情況進(jìn)行蛋白學(xué)檢測(cè)。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一中，在7D，2W，1M，3M四個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，BBB評(píng)分的比較，白藜蘆醇組均高于純損傷組，有非常顯著差異，p＜0.05。溫痛覺(jué)反應(yīng)時(shí)間上看，在1D，3D，7D，2W，1M，3M六個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，白藜蘆醇

5、組溫痛覺(jué)反應(yīng)時(shí)間，均明顯少于純損傷組，有顯著差異，p＜0.05。磁共振檢查，從矢狀面及軸位切面來(lái)看，白藜蘆醇組的表現(xiàn)均較SCI組有較大改善。運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位情況顯示，在7D，2W，1M，3M四個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，誘發(fā)電位的波幅比較，白藜蘆醇組均高于純損傷組，有顯著差異，p＜0.05。TTC染色情況顯示，白藜蘆醇能有效改善損傷脊髓的微循環(huán)，增加組織含氧量。ELISA結(jié)果顯示創(chuàng)傷脊髓損傷引起脊髓組織中的TNFα，IL-6和IL-10水平顯著升高(P＜

6、0.05)。白藜蘆醇治療可顯著降低包括腫瘤壞死因子α和IL-6的促炎性細(xì)胞因子蛋白濃度，同時(shí)增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的濃度(P＜0.05)。同時(shí)白藜蘆醇還可顯著降低神經(jīng)細(xì)胞粘附分子的表達(dá)水平(P＜0.05)，從而進(jìn)一步抑制炎癥的發(fā)生。白藜蘆醇還可以有效增加損傷脊髓的自噬，抑制凋亡的發(fā)生，從而有效保護(hù)脊髓，促進(jìn)脊髓功能的恢復(fù)。
　　在實(shí)驗(yàn)二中，肺臟，腎臟，肝臟組織病理學(xué)評(píng)分顯示，白藜蘆醇可以減輕組織的損傷(P＜0.05)。白藜蘆醇

7、治療后與脊髓損傷組相比，可以降低肺組織W/D和PPI值，減少APQ-1的表達(dá)(P＜0.05)。白藜蘆醇還可以有效降低肺臟、肝臟、腎臟組織中MPO的活性(P＜0.05)。白藜蘆醇治療可顯著降低肺臟、肝臟、腎臟組織中包括腫瘤壞死因子α和IL-6的促炎性細(xì)胞因子蛋白濃度，同時(shí)增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的濃度(P＜0.05)。蛋白印跡的數(shù)據(jù)分析表明，白藜蘆醇治療后引起肺臟、肝臟、腎臟組織SIRT1的表達(dá)顯著上調(diào)，NF-κB活化顯著降低(P＜0.

8、05)。白藜蘆醇還可以有效提高AMPK及LC3-Ⅱ水平的升高(P＜0.05)，促進(jìn)自噬的發(fā)生，同時(shí)降低caspase-3激活的程度(P＜0.05)。
　　結(jié)論:白藜蘆醇可以上調(diào)SIRT1的表達(dá)，降低損傷脊髓的炎癥反應(yīng)，抑制神經(jīng)細(xì)胞粘附分子的表達(dá)，同時(shí)還可調(diào)節(jié)自噬和控制凋亡，保護(hù)脊髓，從而促進(jìn)脊髓損傷大鼠的恢復(fù)脊髓損傷后，由于全身炎癥反應(yīng)的發(fā)生，會(huì)對(duì)遠(yuǎn)隔臟器（肺臟，腎臟，肝臟）造成不同程度的損傷，造成器官功能異常。白藜蘆醇可以上調(diào)S