PPAR-γ調(diào)控脂質(zhì)誘導(dǎo)的Kupffer細(xì)胞極化改變?cè)贜AFLD中的作用.pdf

1、目的：異常脂質(zhì)介導(dǎo)的肝內(nèi)炎癥-免疫調(diào)節(jié)紊亂相關(guān)的低度系統(tǒng)性炎性信號(hào)途徑活化在非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）的發(fā)生發(fā)展中占有重要地位。作為肝內(nèi)代謝-免疫-炎癥活化過程中的關(guān)鍵細(xì)胞，Kupffer細(xì)胞的活化在NAFLD中發(fā)揮重要作用。Kupffer細(xì)胞是定居肝臟的巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞是體內(nèi)重要的炎癥-免疫細(xì)胞，具有高度的可塑性和異質(zhì)性，可針對(duì)不同的微環(huán)境刺激信號(hào)作出應(yīng)答分化成具有不同功能的表型細(xì)胞即極化。過氧化物酶體增殖物激活受體-γ（PP

2、AR-γ）和核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路在調(diào)控機(jī)體能量代謝和炎癥免疫反應(yīng)中具有重要地位并參與巨噬細(xì)胞的極化。本研究擬通過動(dòng)物模型和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)探討高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD和不同種類脂肪酸對(duì)Kupffer細(xì)胞M1-M2極化的影響及核受體PPAR-γ和NF-κB信號(hào)通路在脂質(zhì)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化中的作用，通過調(diào)控核受體PPAR-γ的表達(dá)探討其對(duì)脂質(zhì)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化轉(zhuǎn)變的作用和機(jī)制，并觀察體內(nèi)PPAR-γ激動(dòng)劑對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的Kupffe

3、r細(xì)胞極化和肝臟脂肪變性的影響。
　　方法：高脂飲食喂飼建立小鼠NAFLD模型，肝組織HE染色觀察肝臟脂肪變性，免疫組織化學(xué)觀察 Kupffer細(xì)胞數(shù)量、分布和極化表型；膠原酶原位灌注分離Kupffer細(xì)胞，體外建立不同種類脂肪酸[飽和脂肪酸（SFAs）和多不飽和脂肪酸（PUFAs）]環(huán)境下Kupffer細(xì)胞/巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系，或采用PPAR-γ激動(dòng)劑和拮抗劑分別建立 PPAR-γ高表達(dá)和低表達(dá)的巨噬細(xì)胞模型并以不同種類脂肪酸干預(yù)

4、，Real-time PCR檢測(cè)M1/M2極化基因的表達(dá)，ELISA檢測(cè)炎性因子的分泌水平，Western Blot檢測(cè)NF-κB信號(hào)通路和PPAR-γ等蛋白的表達(dá)，免疫共沉淀檢測(cè)巨噬細(xì)胞核內(nèi) PPAR-γ和 NF-κBp65蛋白相互作用；給予 NAFLD模型小鼠PPAR-γ激動(dòng)劑羅格列酮2-4周灌胃治療，觀察Kupffer細(xì)胞極化和肝臟脂肪變性改變情況。
　　結(jié)果：⑴Kupffer細(xì)胞數(shù)量、分布和極化表型的動(dòng)態(tài)變化與高脂飲食誘導(dǎo)

5、的肝臟脂肪變性程度及肝內(nèi)炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，其中，長(zhǎng)期（16周）高脂飲食引起Kupffer細(xì)胞數(shù)量明顯增加且集中圍繞肝內(nèi)脂肪空泡分布，表現(xiàn) M1型為主的極化，伴有炎性因子分泌增加。⑵飽和脂肪酸-棕櫚酸（PA）誘導(dǎo)Kupffer細(xì)胞/巨噬細(xì)胞M1型為主的M1/M2混合型極化并促進(jìn)炎性因子的分泌，同時(shí)顯著上調(diào)巨噬細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的蛋白磷酸化活化和PPAR-γ蛋白表達(dá)，而多不飽和脂肪酸-二十二碳六烯酸（DHA）則主要誘導(dǎo)Kupffer細(xì)胞

6、/巨噬細(xì)胞M2型極化，對(duì)巨噬細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路無(wú)影響但明顯增加PPAR-γ蛋白表達(dá)。⑶PPAR-γ激動(dòng)劑可使飽和脂肪酸PA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞發(fā)生M1向M2的極化轉(zhuǎn)換，并且鞏固多不飽和脂肪酸DHA誘導(dǎo)的M2型極化，相反，PPAR-γ拮抗劑則降低各種脂質(zhì)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的M2型極化，增強(qiáng)飽和脂肪酸PA誘導(dǎo)的M1型極化；同時(shí)PPAR-γ激動(dòng)劑抑制脂質(zhì)干預(yù)的巨噬細(xì)胞 NF-κB信號(hào)通路并增強(qiáng) PPAR-γ和NF-κBp65蛋白相互作用，而 PPA

7、R-γ拮抗劑則具有相反作用。⑷PPAR-γ激動(dòng)劑羅格列酮治療抑制高脂飲食誘導(dǎo)的Kupffer細(xì)胞M1型極化并減輕肝臟脂肪變性和肝內(nèi)炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)論：①Kupffer細(xì)胞數(shù)量、分布和極化表型的動(dòng)態(tài)變化與高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性程度及肝內(nèi)炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。②不同種類脂肪酸對(duì) Kupffer細(xì)胞/巨噬細(xì)胞M1-M2極化產(chǎn)生不同影響，飽和脂肪酸誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M1型極化與NF-κB信號(hào)通路的活化密切相關(guān)，而PPAR-γ在不同脂質(zhì)介導(dǎo)的