n-3脂肪酸對氧化應激誘導的細胞凋亡的作用及其分子機制.pdf

1、本課題利用SH-SY5Y細胞作為模型研究n-3多不飽和脂肪酸（n-3 PUFAs）對氧化應激誘導的細胞凋亡的作用及相關分子機制。研究采用終濃度為60μmol的n-3 PUFAs預處理細胞24小時后，再以終濃度為500μM的過氧化氫處理細胞一定時間。用Hoechst染色檢測細胞凋亡、用Western blot和RT-PCR方法研究線粒體凋亡通路中 Bcl-2家族蛋白的表達、MAPK抗凋亡信號通路中相關蛋白的表達、Nrf-2-ARE抗氧化應

2、激通中下游目的基因HO-1的表達。用相應試劑盒檢測線粒體膜電位（MMP）的喪失、活性氧（ROS）的生成。
　　研究結果表明，經過500μM過氧化氫處理24h后，SH-SY5Y細胞發(fā)生嚴重的細胞凋亡，60μmol n-3 PUFAs預處理能顯著抑制這種凋亡現(xiàn)象。對細胞凋亡信號通路的Bcl-2家族相關蛋白表達的研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFAs預處理的細胞能夠顯著降低過氧化氫引起的促凋亡蛋白Bax、Bak表達增加；抗凋亡蛋白Bcl-2表達降

3、低的現(xiàn)象。過氧化氫刺激導致細胞正常MMP喪失、細胞內ROS水平顯著上升，而n-3 PUFAs預處理的細胞能維持正常MMP，保護細胞免受氧化應激下的線粒體損傷和顯著抑制ROS水平的升高。MAPK抗凋亡信號通路中相關蛋白的表達研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFAs預處理的細胞能夠顯著降低過氧化氫引起的細胞內Erk蛋白磷酸化水平上升，緩解細胞抵御氧化應激壓力，而對p38的磷酸化調控作用不顯著。在對HO-1基因表達研究中，RT-PCR結果顯示細胞內該基因