MiRNA-130a在小鼠卵泡發(fā)育過程中的表達和對顆粒細胞的影響.pdf

1、MicroRNA是一種細胞內(nèi)源性的非編碼RNA分子，長度約22-24個nt。它對基因表達主要起到負調(diào)控作用，可以抑制特定基因的翻譯或介導(dǎo)其mRNA的降解，從而參與細胞增殖、分化和凋亡等過程的調(diào)控。
　　隨著microRNA研究的不斷深入，近年來發(fā)現(xiàn)利用基因敲除或條件性基因敲除小鼠模型，發(fā)現(xiàn)microRNA及其信號途徑在卵泡發(fā)育過程中也具有重要的調(diào)節(jié)作用。MicroRNA在小鼠卵巢中直接或間接調(diào)節(jié)靶基因或卵泡發(fā)育基因mRNA的表達，

2、從而參與小鼠卵泡發(fā)育過程。
　　本實驗以小鼠為實驗對象，通過real time PCR檢測mir-130a在小鼠不同發(fā)育階段中卵泡和卵泡顆粒細胞中的表達水平，來揭示mir-130a在小鼠卵泡中的表達規(guī)律及推測其可能起到的作用。然后利用小鼠卵巢顆粒細胞體外培養(yǎng)模型，用mir-130a的模擬物轉(zhuǎn)染顆粒細胞，進一步研究了mir-130a對顆粒細胞增殖和細胞凋亡的影響。
　　研究內(nèi)容及實驗結(jié)果如下:
　　1.mir-130a在

3、小鼠卵泡不同發(fā)育階段中的表達具有差異性。分別取新生小鼠出生后12d，21d，21dPMSG48h，21dPMSG48hhCG6h的卵泡提取RNA，通過Q-PCR檢測mir-130a的表達水平，發(fā)現(xiàn)mir-130a在小腔前卵泡(100～130μm)中的表達水平最高，此后在大腔前卵泡(200～280μm)、有腔卵泡(450～550μm)、成熟卵泡（500～600μm）中的表達水平一直顯著下調(diào)(P＜0.05)。
　　2.mir-130a

4、在小鼠不同發(fā)育階段的卵泡顆粒細胞中差異性表達。通過realtimePCR結(jié)果表明:與小腔前卵泡（100～130μm）顆粒細胞的表達水平相比，mir-130a在大腔前卵泡（200～280μm）顆粒細胞中的表達水平顯著下調(diào)(P＜0.05)，此后在有腔卵泡（450～550μm）顆粒細胞中的表達水平也是顯著下調(diào)(P＜0.05)，而在成熟卵泡（500～600μm）顆粒細胞中的表達水平卻顯著上調(diào)(P＜0.05)。我們發(fā)現(xiàn)mir-130a在不同發(fā)育階

5、段的卵泡顆粒細胞中的表達規(guī)律與其在不同發(fā)育階段的卵泡中的表達規(guī)律是不一致的。
　　3.mir-130a對顆粒細胞的增殖沒有影響。從新生小鼠21天后注射PMSG48h,hCG6h的卵巢中獲取成熟卵泡顆粒細胞，經(jīng)過體外顆粒細胞培養(yǎng)和傳代后，用mir-130a的模擬物轉(zhuǎn)染顆粒細胞，利用酶標儀檢測顆粒細胞的增殖水平。結(jié)果顯示:mir-130a的模擬物對顆粒細胞的增殖水平?jīng)]有顯著的影響作用。這一結(jié)果暗示mir-130a可能不參與顆粒細胞的增