野生雁鴨IL-2基因的克隆、表達(dá)及其生物活性檢測(cè).pdf

1、野生雁鴨是重要的珍稀禽類，多種雁鴨屬我國(guó)的二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，也被列入《世界自然保護(hù)聯(lián)盟》國(guó)際鳥(niǎo)類紅皮書。野生雁鴨是濕地生態(tài)系統(tǒng)的主要組成部分，是監(jiān)測(cè)濕地環(huán)境質(zhì)量變化的生物指標(biāo)，具有重要的生態(tài)價(jià)值。雁鴨肉味鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，是我國(guó)馴養(yǎng)繁殖的一個(gè)主要品種，因此野生雁鴨具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來(lái)的研究表明野生雁鴨可能是禽流感等重要病毒性傳染病的天然宿主，受到獸醫(yī)專家和動(dòng)物專家的高度重視，因此也具有重要的科學(xué)研究?jī)r(jià)值。白介素-2(Inerleuki-

2、2)是重要的免疫細(xì)胞因子之一，具有促進(jìn)免疫細(xì)胞存活和增殖、增強(qiáng)免疫應(yīng)答水平，調(diào)節(jié)機(jī)體自身免疫等作用，臨床上被應(yīng)用于增強(qiáng)免疫應(yīng)答水平、建立免疫檢測(cè)指標(biāo)、預(yù)防或治療細(xì)菌和病毒感染等領(lǐng)域。為了了解不同雁鴨IL-2基因的分子差異和遺傳變異水平，并嘗試應(yīng)用細(xì)胞因子對(duì)圈養(yǎng)野生雁鴨進(jìn)行免疫治療，提高雁鴨對(duì)外界環(huán)境的自身免疫水平，我們克隆、表達(dá)了雁鴨IL-2基因，并對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行了初步研究。
　　參照GenBank發(fā)表的番鴨IL-2基因序列，

3、設(shè)計(jì)合成了一對(duì)特異性引物，以經(jīng)ConA誘導(dǎo)培養(yǎng)的的綠頭鴨、赤麻鴨、斑嘴鴨、鴻雁、白額雁和斑頭雁六種雁鴨外周血淋巴細(xì)胞提取的總RNA為模板，應(yīng)用RT-PCR方法擴(kuò)增得到六種雁鴨的IL-2基因。序列分析表明三種鴨的開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度均為423bp，編碼140個(gè)氨基酸。三種雁的開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度均為426bp，編碼141個(gè)氨基酸。序列分析表明六種雁鴨的核苷酸序列相對(duì)較保守，但在某些位點(diǎn)有堿基的變異，同時(shí)引起了相應(yīng)位點(diǎn)編碼的氨基酸的變異。同源性分析表明

4、野生雁鴨與禽類中番鴨和火雞的同源性最高，而與其他種屬的哺乳動(dòng)物及嚙齒類動(dòng)物的IL-2基因的核苷酸同源性均低于49.3％。進(jìn)化樹(shù)結(jié)果表明野生雁鴨與番鴨的遺傳距離最近。
　　將赤麻鴨IL-2基因的成熟肽序列與表達(dá)載體pET32a(+)連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET32a-IL-2，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，在IPTG誘導(dǎo)下IL-2蛋白得到表達(dá)，收集菌液進(jìn)行SDS-PAGE電泳，表達(dá)產(chǎn)物大小約為31.7KDa，與融合蛋白的預(yù)期分子量一致。目的