溫室盆栽春蘭可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌多樣性研究.pdf

1、本研究采用分離培養(yǎng)方法并結(jié)合ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)溫室盆栽春蘭可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性及春蘭根中可分泌IAA 內(nèi)生細(xì)菌多樣性進(jìn)行了初步研究。
　　 通過對(duì)消毒劑次氯酸鈉溶液的處理強(qiáng)度進(jìn)行單因子試驗(yàn)確定春蘭三種器官表面滅菌的最佳條件。結(jié)果顯示：春蘭根和假鱗莖的最佳表面滅菌強(qiáng)度為75％乙醇浸泡3.0 min，3.0％次氯酸鈉溶液浸泡2.0 min，再用75％乙醇浸泡30 s；春蘭葉的最佳表面滅菌強(qiáng)度為75％乙醇

2、浸泡1.0 min，2.0％次氯酸鈉溶液浸泡2.0 min，再用75％乙醇浸泡30 s。
　　 采用R2A、TSA和D?berener 無氮培養(yǎng)基分離純化不同生長狀態(tài)的春蘭根的內(nèi)生細(xì)菌。結(jié)果顯示：R2A 培養(yǎng)基分離到的內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量最多，為2.5×105 cfu/g fw；TSA培養(yǎng)基分離到的次之，為1.9×105 cfu/g fw；D?berener 無氮培養(yǎng)基分離到的最少，為0.9×105 cfu/g fw。對(duì)分離菌株進(jìn)行

3、ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)分離得到的211 株內(nèi)生細(xì)菌分屬于α-變形菌綱（50.9％）、γ-變形菌綱（34.6％）、β-變形菌綱（6.7％）、厚壁菌門（5.2％）、放線菌門（1.9％）和擬桿菌門（0.7％）6 大分類單元的23個(gè)已知屬，優(yōu)勢(shì)菌屬為根瘤菌屬（48.3％）和Dyella（25.8％）。其中R2A 培養(yǎng)基分離到21個(gè)屬，TSA 培養(yǎng)基分離到11個(gè)屬，D?berener 無氮培養(yǎng)基分離到12個(gè)屬，數(shù)據(jù)顯示R2

4、A 培養(yǎng)基為春蘭根內(nèi)生細(xì)菌最佳分離培養(yǎng)基。
　　 采用R2A和TSA 培養(yǎng)基對(duì)春蘭根、假鱗莖、葉三種器官的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，結(jié)果顯示：假鱗莖中分離到的內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量最高，為2.80×103 cfu/g fw；根次之為2.08×103 cfu/g fw；葉最少為0.22×103 cfu/g fw。三種器官共分離到春蘭內(nèi)生細(xì)菌123 株，其中分離自根中的57 株分屬于5 大類群的14個(gè)屬，優(yōu)勢(shì)菌屬為類芽孢桿菌屬（45.79％）

5、；
　　 分離自假鱗莖中的55 株分屬于5 大類群的15個(gè)屬，優(yōu)勢(shì)菌屬為伯克氏菌屬（42.67％）和鞘氨醇單胞菌屬（21.33％）；分離自葉的11 株分屬于4 大類群的7個(gè)屬，無明顯優(yōu)勢(shì)菌屬。結(jié)果表明春蘭部分內(nèi)生細(xì)菌顯示出器官專一性。以上結(jié)果說明春蘭內(nèi)生細(xì)菌群落具有豐富的多樣性。
　　 采用Salkowski 比色法對(duì)分離自春蘭根的256 株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分泌IAA的功能篩選，其中57 株具有分泌IAA 能力，占篩選菌株總

6、數(shù)的22.3％。對(duì)該57 株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果顯示：其分屬于6 大類群的18個(gè)已知屬和4個(gè)潛在新種或新屬，其中類芽孢桿菌屬既是可分泌IAA的內(nèi)生細(xì)菌中的最優(yōu)勢(shì)菌屬（29.8％），又是高產(chǎn)IAA的主體類群。
　　 據(jù)目前所知，Altererythrobacter、Brachybacterium、Chitinophaga、Cellulosimicrobium、Dyella、Labrys、Pa