溫室盆栽春蘭可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌多樣性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究采用分離培養(yǎng)方法并結(jié)合ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)溫室盆栽春蘭可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性及春蘭根中可分泌IAA 內(nèi)生細(xì)菌多樣性進(jìn)行了初步研究。
   通過對(duì)消毒劑次氯酸鈉溶液的處理強(qiáng)度進(jìn)行單因子試驗(yàn)確定春蘭三種器官表面滅菌的最佳條件。結(jié)果顯示:春蘭根和假鱗莖的最佳表面滅菌強(qiáng)度為75%乙醇浸泡3.0 min,3.0%次氯酸鈉溶液浸泡2.0 min,再用75%乙醇浸泡30 s;春蘭葉的最佳表面滅菌強(qiáng)度為75%乙醇

2、浸泡1.0 min,2.0%次氯酸鈉溶液浸泡2.0 min,再用75%乙醇浸泡30 s。
   采用R2A、TSA和D?berener 無氮培養(yǎng)基分離純化不同生長(zhǎng)狀態(tài)的春蘭根的內(nèi)生細(xì)菌。結(jié)果顯示:R2A 培養(yǎng)基分離到的內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量最多,為2.5×105 cfu/g fw;TSA培養(yǎng)基分離到的次之,為1.9×105 cfu/g fw;D?berener 無氮培養(yǎng)基分離到的最少,為0.9×105 cfu/g fw。對(duì)分離菌株進(jìn)行

3、ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)分離得到的211 株內(nèi)生細(xì)菌分屬于α-變形菌綱(50.9%)、γ-變形菌綱(34.6%)、β-變形菌綱(6.7%)、厚壁菌門(5.2%)、放線菌門(1.9%)和擬桿菌門(0.7%)6 大分類單元的23個(gè)已知屬,優(yōu)勢(shì)菌屬為根瘤菌屬(48.3%)和Dyella(25.8%)。其中R2A 培養(yǎng)基分離到21個(gè)屬,TSA 培養(yǎng)基分離到11個(gè)屬,D?berener 無氮培養(yǎng)基分離到12個(gè)屬,數(shù)據(jù)顯示R2

4、A 培養(yǎng)基為春蘭根內(nèi)生細(xì)菌最佳分離培養(yǎng)基。
   采用R2A和TSA 培養(yǎng)基對(duì)春蘭根、假鱗莖、葉三種器官的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng),結(jié)果顯示:假鱗莖中分離到的內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量最高,為2.80×103 cfu/g fw;根次之為2.08×103 cfu/g fw;葉最少為0.22×103 cfu/g fw。三種器官共分離到春蘭內(nèi)生細(xì)菌123 株,其中分離自根中的57 株分屬于5 大類群的14個(gè)屬,優(yōu)勢(shì)菌屬為類芽孢桿菌屬(45.79%)

5、;
   分離自假鱗莖中的55 株分屬于5 大類群的15個(gè)屬,優(yōu)勢(shì)菌屬為伯克氏菌屬(42.67%)和鞘氨醇單胞菌屬(21.33%);分離自葉的11 株分屬于4 大類群的7個(gè)屬,無明顯優(yōu)勢(shì)菌屬。結(jié)果表明春蘭部分內(nèi)生細(xì)菌顯示出器官專一性。以上結(jié)果說明春蘭內(nèi)生細(xì)菌群落具有豐富的多樣性。
   采用Salkowski 比色法對(duì)分離自春蘭根的256 株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分泌IAA的功能篩選,其中57 株具有分泌IAA 能力,占篩選菌株總

6、數(shù)的22.3%。對(duì)該57 株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析,結(jié)果顯示:其分屬于6 大類群的18個(gè)已知屬和4個(gè)潛在新種或新屬,其中類芽孢桿菌屬既是可分泌IAA的內(nèi)生細(xì)菌中的最優(yōu)勢(shì)菌屬(29.8%),又是高產(chǎn)IAA的主體類群。
   據(jù)目前所知,Altererythrobacter、Brachybacterium、Chitinophaga、Cellulosimicrobium、Dyella、Labrys、Pa

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