南瓜屬植物總RNA的提取及抗氧化酶基因的擴增.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、RNA提取是研究基因分離和表達的第一步，從含有多酚、多糖以及次生代謝物質的植物組織中提取RNA存在很多問題，會造成RNA在提取過程中氧化、褐化、降解。為了建立一種經(jīng)濟快速的從南瓜屬植物中提取RNA的方法，本文嘗試了CTAB法、一步法、尿素/氯化鋰法、熱酚法、LUG法5種方法，對他們的結果進行比較和改進之后確定了一種適合南瓜和西葫蘆組織的RNA提取方法即改良CTAB法。該方法全程只需要2h，通過用等體積的異丙醇在-20℃處理20min來沉

2、淀RNA，用高濃度的NaCl(1.0-2.5M)和醋酸鈉來有效的去除多糖類化合物，利用該方法從西葫蘆和南瓜葉子以及果肉中成功的提取了總RNA。提出來的RNA很清楚的顯示出28s和18s兩條鏈，RNA的產(chǎn)量是210-250μg/g鮮重，A260/280是2.08-2.15，A260/230是2.0-2.12，提出來的RNA是沒有多酚、多糖、蛋白質污染的高純度的RNA。
　　同時驗證了RNA的保存方法，將RNA沉淀浸入無水乙醇中然后放

3、在-80℃冰箱中保存，靜置6個月后RNA質量無變化。建立了一種簡并引物設計的方法:在NCBI中搜索出同一個屬中15種植物中同一種蛋白質的序列，然后在NCBI中找出對應的eDNA序列，利用CLCMain Workbench6，通過sequence alignment，結合引物設計的原則，設計出了南瓜和西葫蘆組織中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶基因的簡并引物。
　　將南瓜和西葫蘆葉子和果肉中的Cu/Z

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