基于SELEX的表皮生長因子受體(EGFR)DNA核酸適體篩選的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)是原癌基因c-erbB1的表達產(chǎn)物,是表皮生長因子受體(Human EGF receptor,HER)家族成員之一,屬于I型跨膜酪氨酸激酶受體。廣泛分布于哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質細胞、角質細胞等細胞表面。EGFR在生理條件下,其通過調節(jié)細胞分化及細胞形態(tài)在組織生長及發(fā)育過程中起重要作用。然而,在許多實體腫瘤中存在EGFR的高表達或異常

2、表達,如膠質瘤、皮膚癌、腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌。此外,EGFR過度表達與腫瘤細胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲轉移及細胞凋亡的抑制有關。EGFR高表達還與膠質母細胞瘤放療耐受性有關,抑制EGFR可以增加膠質母細胞瘤放療敏感性。因此,EGFR已成為研究重要的靶點之一。目前抗EGFR的藥物包括 EGFR單克隆抗體西妥昔單抗(Cetuximab)及蛋白激酶抑制劑吉非替尼(Gefitinib)。由于兩者均屬于蛋白類,其化學修飾困難及強

3、免疫原性,限制其使用及效果。核酸適體是經(jīng)配體指數(shù)富集系統(tǒng)進化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment,SELEX)技術篩選出的能特異結合蛋白質或其他物質的寡聚核苷酸片段,具有比抗體更好的化學性質,與各種大小分子具有高選擇性和高親和力,此外,還具有無毒性、無免疫原性等優(yōu)點,這使得在蛋白質研究中顯示出很好的作用,特別是在檢測腫瘤生物標志物研究中。通過SELEX技術可

4、以簡便且快速獲得高特異性及高親和力的核酸適體,在生物醫(yī)學基礎研究和臨床診斷與治療方面顯示出巨大的應用前景。目前血管內皮細胞生長因子(VEGF)核酸適體作為藥物已經(jīng)過FDA批準進入臨床,治療年齡相關性黃斑變性。EGFR RNA核酸適體已篩選出,但由于RNA核酸適體很容易被核酸酶降解,及篩選過程復雜及費用昂貴,限制其使用。而DNA核酸適體具體穩(wěn)定、不易被核酸酶降解、易于合成、費用低廉、易儲存的特點,更具有更廣闊的應用空間。本實驗組選擇單鏈D

5、NA核苷酸作為初始庫進行EGFR核酸適體的篩選。
  本文用重組EGFR(胞外區(qū))為靶蛋白,Ni磁珠作為反篩蛋白,以76個堿基隨機單鏈DNA寡核苷酸庫作為初始庫,經(jīng)過11輪篩選,獲得22條與靶蛋白EGFR-磁珠高特異性和高親和力的DNA核酸適體。對第11輪庫進行解離常數(shù)(Kd)的測定,測得Kd=107±26 nM,而對照初始庫與靶蛋白基本不結合。其中,選擇其中一條核酸適體命名為TuTu22,并將篩選出的核酸適體TuTu22與EGF

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