食品中乳鐵蛋白的測定-標準送審稿140423

1、中華人民共和國國家標準GBxxxx—201x食品安全國家標準食品中乳鐵蛋白的測定（征求意見稿）201xxxxx發(fā)布201xxxxx實施GBGBXXXXXXXX33.12.3乳鐵蛋白標準工作溶液：分別準確吸取乳鐵蛋白標準中間溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL，5.0mL至10mL容量瓶中，用水定容。該標準系列濃度分別為0.00μgmL、50μgmL、100μgmL、150μgmL、200μgmL、250μgmL

2、。臨用前配制。3.13肝素親和柱（1mL）：于4℃冰箱內(nèi)儲存。3.140.45μm微孔水相濾膜。4儀器和設備4.1高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器（DAD）或紫外檢測器。4.2電子天平：感量為0.01g和0.01mg。4.3冷凍離心機：轉速≥10000rmin。4.4pH計：精度為0.01。4.5渦旋振蕩器。5分析步驟5.1試樣制備5.1.1液體試樣：準確稱取5g(精確至0.01g)試樣（試樣中含乳鐵蛋白0.1mg～10mg）于50

3、mL離心管中，待提取。5.1.2固體試樣：準確稱取1g（精確至0.01g）試樣（試樣中含乳鐵蛋白0.1mg～10mg）于50mL燒杯中，待提取。5.2提取5.2.1液體試樣：試樣中加入5mL磷酸氫二鈉溶液渦旋振蕩器振蕩0.5min，4℃下以10000rmin轉速離心10min，將上清液轉移到另一50mL離心管中。再加入5mL磷酸氫二鈉溶液重復操作一次，合并兩次液體作為樣品提取液備用。5.2.2固體試樣：試樣中加入5mL溫熱的磷酸氫二鈉溶

4、液（溫度不超過50℃），攪拌使樣品完全溶解，將樣品全部轉入50mL離心管中。再向原燒杯中加入5mL磷酸氫二鈉溶液，合并兩次液體。漩渦振蕩器振蕩0.5min，4℃下以10000rmin轉速離心10min。將上清液轉移到另一50mL離心管中，再加入5mL磷酸氫二鈉溶液重復操作一次，合并兩次液體作為樣品提取液備用。5.3凈化肝素親和柱先加入5mL磷酸氫二鈉溶液平衡，處理完畢后加入樣品提取液，待樣液完全流出后，再用10mL磷酸氫二鈉溶液(3.7

5、)淋洗，棄去全部流出液。最后用2.5mL磷酸氫二鈉氯化鈉溶液洗脫，收集全部流出液，用磷酸氫二鈉氯化鈉溶液(3.7)定容至2.5mL。將收集溶液過濾膜，供液相色譜檢測分析用。5.4儀器參考條件5.4.1色譜柱：C4，5μm，300A。（孔徑），250mm4.6mm（內(nèi)徑）或相當者。5.4.2檢測波長：280nm。5.4.3柱溫：30℃。5.4.4進樣體積：50μL。5.4.5流速：1.0mLmin。5.4.6流動相：0.1%三氟乙酸溶液和