喹諾酮類抗生素與生物大分子的相互作用的熒光法研究.pdf

1、本文結合分子發(fā)光光譜中的三種方法，即熒光猝滅法、同步熒光法和熒光共振能量轉移光譜法，從分子層面研究環(huán)境中殘留的抗生素與大型生物體中重要的生物大分子——消化酶的相互作用機理，通過實驗得到了喹諾酮類抗生素與生物大分子結合的理論數(shù)據(jù)，為今后進一步研究抗生素對大型生物體的具體危害，研發(fā)環(huán)境友好型抗生素提供了理論基礎。本文還利用生物大分子與分子發(fā)光光譜探針結合的特性建立了新的分析方法，為環(huán)境科學中關于生物大分子的微觀研究領域做了一些基礎工作。

2、 本文主要利用分子熒光光譜法的熒光猝滅理論及熒光共振能量轉移理論，選取喹諾酮類抗生素中的具有代表性的氧氟沙星、依諾沙星、乳酸左氧氟沙星，在實驗室條件下，研究其與消化酶的相互作用。結果表明在消化酶濃度一定的條件下，隨著喹諾酮類抗生素濃度的增加，消化酶的內(nèi)源熒光強度有規(guī)律地降低，氧氟沙星與乳酸左氧氟沙星的最大發(fā)射波長的熒光強度有規(guī)律的增加，而依諾沙星的最大發(fā)射波長的熒光強度保持不變。說明喹諾酮類抗生素與消化酶中的色氨酸、酪氨酸殘基發(fā)生

3、了相互作用，并且消化酶與氧氟沙星、乳酸左氧氟沙星共同構成了新的分子剛性結構而發(fā)生了能量轉移現(xiàn)象。進一步通過熒光猝滅理論的討論得出，喹諾酮類抗生素與消化酶的相互作用屬于靜態(tài)猝滅，結合熒光共振能量轉移理論與化學熱力學討論，分別得出三種喹諾酮類抗生素與消化酶的成鍵類型與結合的位點數(shù)。 本文利用熒光共振能量轉移光譜法建立了一個新的熒光共振能量轉移體系，在λex/λem=400/530nm，0.1mol/L的Tris—HCl溶液(pH=

4、7.0)，異硫氰酸熒光素和羅丹明6G能夠發(fā)生有效的熒光共振能量轉移，使得羅丹明6G熒光大大增強，同時異硫氰酸熒光素的熒光猝滅．而BSA的加入使得羅丹明6G的熒光強度減弱并且BSA的加入量與體系的FD/FA昱良好的線性關系，由此建立了一種新的測定的BSA的方法。研究結果表明，BSA的含量在10mg/L-35mg/L范圍內(nèi)與染料的熒光強度減弱程度呈良好的線性關系，方法最低檢出限為9.5mg/L；該法用于合成樣中BSA的測定，回收率為96.5

5、％。 本文同樣建立了以羅丹明123和羅丹明B染料對為供受體的新的熒光共振能量轉移體系，在該體系中加入BSA，發(fā)現(xiàn)在加入BSA后羅丹明123和羅丹明B的熒光強度都明顯降低，且BSA的加入量與羅丹明123和羅丹明B體系的熒光猝滅程度呈良好的線性關系．據(jù)此提出了羅丹明123和羅丹明B能量轉移體系測定BSA的新方法。實驗表明，在λex/λem=478/580nm，0.1mol/L的Tris—HCl溶液(pH=7.0)Tris溶液(pH

6、=7.0)存在下，羅丹明123和羅丹明B能夠發(fā)生有效的熒光共振能量轉移。BSA含量8mg/ml～23mg/ml的范圍內(nèi)與體系猝滅程度呈良好的線性關系，方法的最低檢出限為8.6mg/mL應用該體系測定了合成樣中的BSA含量，回收率達到92.3％。 本文運用分子熒光光譜法的熒光猝滅理論初步探索了喹諾酮類抗生素與生物大分子結合反應的化學機理，為其毒理分析做了一些基礎研究工作，為尋找測定抗生素的光譜探針提供了理論依據(jù)。同時本文還研究了