美國藥典微生物限度檢測

1、16161微生物限度檢測微生物限度檢測（MICROBIALMICROBIALLIMITLIMITTESTSTESTS）此章提供方法來檢測可能存在的好氧微生物其他制藥過程中可能出現(xiàn)的微生物的數(shù)量，包括原材料和成品中的。如果經(jīng)過驗證確認可以得到相同或更好的檢測結(jié)論，也允許采用自動化的檢測方法。在樣品檢測過程中須進行無菌操作。若無特別說明，則“培養(yǎng)（incubate）”一詞指在30—35℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24至48小時；“生長（growth）”

2、一詞用于專門的判定，說明“存在和可能存在活的微生物”。準備實驗準備實驗(Preparaty(PreparatyTesting)Testing)本章涉及實驗結(jié)果的有效性取決于：提供的被檢測樣品本身在實驗條件下，被充分證明不會抑制可能存在的微生物的生長。因此，在準備樣品時，需要正規(guī)的實驗操作和符合要求的實驗條件，接種稀釋樣品到含有以下（微生物）培養(yǎng)物的培養(yǎng)基：金黃色（奧里斯）葡萄球菌（Staphylococcusaureus）大腸埃希氏菌（

3、Escherichiacoli）銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和沙門氏菌（Salmonella）。方法如下：將用肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后的（微生物）不小于103稀釋的微生物培養(yǎng)物，加1ml（微生物）培養(yǎng)液到磷酸(鹽)緩沖液(pH7.2)，液體大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基（FluidSoybeanCaseinDigestMedium），或者液體乳糖培養(yǎng)基（FluidLactoseMedium）。相應培養(yǎng)基培養(yǎng)失敗則需

4、要采取以下方法更改檢測程序：（1）增加稀釋液體積，檢測樣品加入量仍維持不變；或者（2）中和一定數(shù)量的干擾因子；或者（3）結(jié)合（1）、（2）得出適當條件，使接種物得以生長。以下是一些物質(zhì)的成分和濃度，該物質(zhì)及濃度可用于加入培養(yǎng)基、阻止物質(zhì)發(fā)揮抑菌作用：大豆卵磷脂（soylecithin0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysbate204.0%）。然后重復前面的實驗，用液體酪蛋白消化物大豆卵磷脂聚山梨醇酯20（FluidCaseinDig

5、estSoylecithinPolysbate20Medium）論證待測樣品里的防腐劑或其他抑菌因子被中和。若產(chǎn)品中含有抑菌物質(zhì)且產(chǎn)品是可溶性的，則采用“無菌實驗（SterilityTests）”里的“薄膜過濾法(MembraneFiltrationMethod)”進行(微生物限度)檢測會更適宜（suitable）。在抑菌物質(zhì)得以適當中和、稀釋液體積大幅度增加后仍不能排除抑制因子，以及不適宜用“薄膜過濾法”的情況下，可能會因為產(chǎn)品本身的

6、殺菌作用導致細菌無法生長。當產(chǎn)品不能檢測出接種菌種的情況下，應用光譜法確定產(chǎn)品的抑菌殺菌成分。緩沖液和培養(yǎng)基緩沖液和培養(yǎng)基(Buffer(BufferSolutionSolutionMedia)Media)按照下列配方配制培養(yǎng)基，或者使用規(guī)范廠商生產(chǎn)的培養(yǎng)基干粉進行培養(yǎng)基配制，所使用的干粉培養(yǎng)基應該與在此列出的培養(yǎng)基成分比例相似。在按列出的配方進行培養(yǎng)基配制時，用水溶解固體物質(zhì)，必要時可以加熱以得到完全溶解的均勻溶液。在使用前用鹽酸或氫

7、氧化鈉將培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)到要求范圍，調(diào)節(jié)pH值應在252O條件下進行。若培養(yǎng)基配方有瓊脂，應使用濕度不超過15%的瓊脂。溶解水為純化水（PurifiedWater）。PHPH7.27.2磷酸磷酸(鹽)緩沖液緩沖液儲備液——稱34g磷酸二氫鉀于1000mL容量瓶，加水500mL溶解。用氫氧化鈉TS調(diào)節(jié)pH至7.20.1（約175mL），然后加水至容量瓶刻度，混勻。分裝溶液后滅菌。冰箱保存。36、VogelJohnson瓊脂培養(yǎng)基酪蛋白胰

8、酶消化物10.0g酵母膏5.0g甘露醇10.0g磷酸氫二鉀5.0g（DibasicPotassiumPhosphate）氯化鋰5.0g氨基乙酸（糖膠）10.0g瓊脂16.0g酚紅25.0mg水1000mL溶解后煮沸1分鐘。滅菌，冷卻至45~50℃，然后加20mL滅菌后的亞碲酸鉀（1：100）。滅菌后pH值：7.20.27、溴棕三甲銨瓊脂培養(yǎng)基白明膠胰酶消化物20.0g氯化鎂1.4g硫酸鉀10.0g瓊脂13.6g溴棕三甲銨0.3g丙三醇1

9、0.0mL水1000mL將所有固體溶質(zhì)加入水中，再加入丙三醇，攪拌加熱，煮沸1分鐘得均勻溶液。滅菌后pH值：7.20.28、假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基檢測熒光生二氫熒光素酪蛋白胰酶消化物10.0g動物組織胃蛋白酶消化物10.0g無水磷酸氫二鉀1.5g硫酸鎂（MgSO47H2O）1.5g丙三醇10.0mL瓊脂15.0g水1000mL將所有固體溶質(zhì)加入水中，再加入丙三醇，攪拌加熱，煮沸1分鐘得均勻溶液。滅菌后pH值：7.20.29、假單胞菌瓊脂培養(yǎng)