western轉膜條件

1、western轉膜條件轉膜條件蛋白來源：RAW264.7總蛋白蛋白名稱（可保密）：一些轉錄因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜類型、孔徑：0.45NC轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉恒流400mA轉膜時間：60~90minPS.其實吧，以我的經驗來看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉膜時間真的不是那么重要，曾經因為失誤，轉了15min就拆下來了，但從麗春紅染色來看，跟平常實驗也沒有太大的區(qū)別。蛋白來源：內皮細胞總蛋白蛋白名稱（可保密

2、）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜類型、孔徑：0.45PVDF轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉恒壓100V轉膜時間：60~70min設備名字是“BioRadmini”。蛋白來源：乳鼠心肌細胞和成年鼠心肌組織總蛋白和核蛋白蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜類型、孔徑：PVDF（預先用甲醇處理）轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉恒壓12V轉膜時間：3040min設備：“BioRadmini

3、”建議：最開始做過濕轉（過夜的那種），太費事費時，效果也不如半干轉。蛋白來源：293T細胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜類型、孔徑：PVDF轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉恒壓90V110V，控制電流不要超過300mA。轉膜時間：70min蛋白來源：腫瘤手術標本蛋白名稱（可保密）：轉錄因子蛋白分子量：33KDaWB用膜類型、孔徑：PVDF膜轉膜方式（恒壓、恒流）：350mA恒流轉膜時間：150min蛋白名稱（可保

4、密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB用膜類型、孔徑：millipePVDF膜0.45um轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流0.3A。轉膜時間：180min設備：“BioRad”建議：電轉保持電壓在70V以上，保持低溫，如果電壓低過70就需要換緩沖液了。蛋白來源：白血病細胞蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB用膜類型、孔徑：0.45的NC膜轉膜方式（恒流）：濕轉，90min，0.25A設備：“BioRad”建議：海綿厚度要

5、合適，一次轉磨用的海綿太薄，導致三明治沒夾緊，轉膜后拿出來一看，marker都變得七扭八歪。但是有前輩說墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒經歷過，不知道是不是會有這種情況。蛋白來源：腫瘤細胞蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10200KDaWB用膜類型、孔徑：millipePVDF膜0.45um轉膜方式（恒壓、恒流）：120v恒壓轉膜時間：120min轉膜設備：濕轉BioRad建議：轉膜緩沖液只用2次，基本都轉上，5%BSA封閉，減少