島津液相色譜使用方法和注意事項

1、【轉(zhuǎn)帖轉(zhuǎn)帖】島津液相色譜儀注意事項島津液相色譜儀注意事項島津液相色譜儀注意事項1.流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細(xì)的膜過濾)。2.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。3.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。4.使用緩沖溶液時，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對

2、于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。5.長時間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇等)，因為純水易長霉。6.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。7.C18柱絕對不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。8.堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法；①以異丙醇作溶劑沖洗：②放在異丙醇中間用超聲波清洗；③用10％稀硝酸清洗。9.

3、氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。10.如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動相的清洗。11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。12.更換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。高效液相色譜常見故障的斷定及解決可能的原因及解決方法(一)保留時間變化1.柱溫變化柱恒溫，必要時需配

4、置恒溫箱2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動相平衡柱3.緩沖液容量不夠用》25mmolL的緩沖液4.柱污染每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件調(diào)節(jié)流動相6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱(二)保留時間縮短1.流速增加檢查泵重新設(shè)定流速2.樣品超載降低樣品量3.鍵合相流失流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向4.流動相組成變化防止流動相蒸發(fā)或沉淀5.溫度增加柱恒溫(三)保留時間延長1.流速下降管路泄漏更換泵密封圈排除泵內(nèi)氣泡2

5、.硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動相改性劑如加三乙胺或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失同前(二)34.流動相組成變化同前(二)45.溫度降低同前(二)5(四)出現(xiàn)肩峰或分1.樣品體積過大用流動相配樣總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱采用較弱腐蝕性條件c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相

6、的黏度)。d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。2、流動相流速的選擇：因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為

7、4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。當(dāng)選用最佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。注意：a由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。b對于正相柱推薦使用沸程為3060℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐)，

8、去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。c含水流動相最在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長。d流動相要求使用0.45m濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。e使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能液相色譜的常用術(shù)語1、色譜曲線romatogram）：色譜柱流出物通過檢測器系統(tǒng)時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時間或流動相流出體積的曲線圖，或者通色譜圖（ch過適當(dāng)

9、的方法觀察到的紙色譜或薄層色譜斑點(diǎn)、譜帶的分布圖。2、（色譜）峰（chromatographicpeak）：色譜柱流出組分通過檢測器系統(tǒng)時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號的微分曲線。3、峰底（peakbase）：峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間的連接的直線。4、峰高（h，peakheight）：色譜峰最大值點(diǎn)到峰底的距離。5、峰寬（W，peakwidth）：在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)的距離。6、半高峰寬（Wh2，peakwithdathalfheight）

10、：通過峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線，此直線與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離（圖1中的HJ）。7、峰面積（A，peakarea）：峰與峰底之間的面積（圖1中的CHEJDC）。8、拖尾峰（tailingpeak）：后沿較前沿平緩的不對稱的峰。9、前伸峰（leadingpeak）：前沿較后沿平緩的不對稱的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）10、假峰（ghostpeak）：除組分正常產(chǎn)生的色譜峰外，由于儀器條件的變化等原因而在譜圖上出現(xiàn)的色譜峰，即并非由試樣

11、所產(chǎn)生的峰。這種色譜峰并不代表具體某一組分，容易給定性、定量帶來誤差。（又叫鬼峰）11、畸峰（distrtedpeak）：形狀不對稱的色譜峰，前伸峰、拖尾峰都屬于這類。12、反峰（negativepeak）：也稱倒峰、負(fù)峰，即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰。柱的使用和維護(hù)注意事項(推薦)色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。①避免壓力和溫度的急劇

12、變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。②.應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞