粳稻云引受稻瘟病菌誘導后逆境相關候選基因的克隆及轉化.pdf

1、基因芯片作為一種高端的生物信息學技術，在分子生物學、基因組學、蛋白組學等方面發(fā)揮著巨大的作用，該技術自1995年問世以來，就廣泛應用于基因表達譜分析、新基因的發(fā)掘、功能基因組研究等領域。
　　 本研究在實驗室已經構建好的粳稻云引受稻瘟病誘導表達的基因芯片的基礎上，主要得到以下結果：
　　 (1)以粳稻云引和其離子束誘變材料4048(稻瘟病感病)為實驗材料，選擇基因表達芯片中對稻瘟病菌誘導作出響應的顯著相關的候選基因CB6

2、52033和AK065873進行克隆，并通過RACE技術得到了EST CB652033的cDNA全長。
　　 (2)測序表明，云引和4048中CB652033的同源性為95.6[％]，但有幾個堿基的缺失，而AK065873在云引和4048之間的差異甚大，其同源性僅為87.3[％]，誘變材料中缺失一段長達102bp的序列，預測該基因可能是云引抗病而4048感病的一個原因。
　　 (3)通過對NCBI中GeneBank檢索發(fā)

3、現，CB652033與磷酸核酮糖激酶和磷酸戊糖激酶的活性相關，這兩種酶在糖代謝中起到重要的作用，因而推測此基因可能參與磷酸核酮糖和磷酸戊糖的代謝活動。AK065873為一種bzip轉錄因子，其功能與ABI5類似。
　　 (4)通過與NCBI中GeneBank比對，下載比對序列，運用MEGA4構建了兩基因的遺傳進化樹。結果發(fā)現，CB652033在水稻中有5個同源性近90[％]的序列，而與NM-001054360的同源性達到99[％

4、]，推測其就是NM-001054360的一個EST。AK065873與水稻中ABI5的編碼基因NM-001069897的同源性達到95.89[％],與玉米中編碼ABI5的基因EU961169的同源性有84.35[％]，與小麥中編碼ABI5的AY150675的同源性達到85.42[％]。
　　 (5)熒光定量PCR表明，CB652033在接種12h時表達最上調，隨著時間的推移又逐漸下調，與基因表達芯片數據大致吻合，說明該基因在遇到

5、病原菌侵襲時起到了一定的防御作用，而后續(xù)的表達下調則可能是該基因的防御不足以抵擋病害的侵襲，因此一直受到抑制。AK065873基因在稻瘟病菌接種12h時表達最上調，隨后隨著時間的推移，一直下調表達，直到96h時又上調表達，結合bzip轉錄因子的特性及其表達特性，推測該基因在病蟲害侵襲時會產生抗性反應，在病害侵襲方面有一定的抵抗功能。
　　 (6)以pBI121為空載體，分別在擴增兩個基因的引物兩端加入酶切位點，構建了該兩個基因的