利用抑制性差減雜交研究鎳脅迫下安氏偽鏢水蚤響應(yīng)的分子機(jī)理.pdf

1、近年來，隨著城市化進(jìn)程和工業(yè)化發(fā)展，環(huán)境污染問題日益凸顯。其中，重金屬污染具有隱蔽性、不可逆性、生物不可降解性、穩(wěn)定性等特點(diǎn)，因而重金屬被看成是危害最大的污染物之一。鎳是一種廣泛存在的重金屬，在痕量時(shí)為很多動(dòng)物生長和繁殖所必需，但高濃度的鎳對(duì)生物體是有毒的，可以引起皮膚過敏、免疫毒性和腎臟毒性等，鎳及其化合物被劃分為人類的致癌物。但是關(guān)于鎳對(duì)水生生物的毒性作用及機(jī)理的研究相對(duì)較少，而安氏偽鏢水蚤（Pseudodiaptomusannan

2、dalei）具有成為環(huán)境指示生物的潛能。本研究以安氏偽鏢水蚤為研究對(duì)象，構(gòu)建鎳脅迫下安氏偽鏢水蚤差異表達(dá)基因文庫，對(duì)文庫中篩選到的基因進(jìn)行全長擴(kuò)增和深入分析，并對(duì)鎳脅迫下基因的表達(dá)模式進(jìn)行研究，以期為重金屬鎳脅迫下水生動(dòng)物的分子響應(yīng)機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　 本文的主要研究結(jié)果如下:
　　 1.構(gòu)建鎳脅迫下安氏偽鏢水蚤SSHcDNA文庫以8.86mg/L鎳脅迫下的安氏偽鏢水蚤為實(shí)驗(yàn)組，以未處理的安氏偽鏢水蚤為對(duì)照組，利用S

3、SH技術(shù)構(gòu)建鎳脅迫下安氏偽鏢水蚤差異cDNA文庫，文庫包含重組質(zhì)粒容量為1.12×106cfu，重組質(zhì)粒中插入片段大小分布500bp以下約占28.3％，500-1000bp約占63.0％，1000bp以上約占8.7％。
　　 2.克隆獲得了安氏偽鏢水蚤129個(gè)相關(guān)表達(dá)基因隨機(jī)測序674個(gè)陽性克隆子，經(jīng)過分析和拼接，共獲得129個(gè)安氏偽鏢水蚤基因。經(jīng)基因本體釋義工具分析，有119個(gè)基因分別參與了不同的生物學(xué)過程。其中，34個(gè)(26

4、.4％)參與了細(xì)胞新陳代謝過程，24個(gè)(18.6％)與轉(zhuǎn)錄和翻譯進(jìn)程有關(guān)，20個(gè)(15.5％)參與抗氧化防御和應(yīng)激響應(yīng)，11個(gè)(8.5％)參與細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)維持，10個(gè)(7.8％)與細(xì)胞骨架的組裝相關(guān)，9個(gè)(7.0％)參與生物學(xué)調(diào)節(jié)過程，9個(gè)(7.0％)參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過程。另有10個(gè)基因的功能未知，將之劃分為未知功能群。
　　 3.SMARTRACEPCR獲得了18個(gè)包含完整開放閱讀框的cDNA序列利用SMART技術(shù)批量

5、擴(kuò)增克隆了18個(gè)包含完整開放閱讀框的安氏偽鏢水蚤表達(dá)基因cDNA序列，其中精氨酸激酶、細(xì)胞色素c氧化酶Ⅱ、細(xì)胞色素c氧化酶Ⅲ、組織蛋白酶D、鐵蛋白、熱休克蛋白70、熱休克蛋白90、熱休克蛋白β1、肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈、肌球蛋白堿性輕鏈1、神經(jīng)鈣離子感應(yīng)蛋白2、抑制蛋白、核糖體蛋白L10a、核糖體蛋白L3、翻譯控制腫瘤蛋白、卵黃蛋白原2等16個(gè)為全長序列。深入分析了這些序列的特征，預(yù)測其編碼蛋白質(zhì)的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)及功能。
　　 4.分析了