豫谷一號BAC文庫的構建及鑒定.pdf

1、谷子(Setaria italica Beauv.)，是世界上最古老的農作物之一，并且作為一種重要的糧食作物，在我國北方的糧食生產中占有重要地位。谷子具有多種優(yōu)良的農藝性狀，目前已經證實的性狀如耐旱、耐貧瘠等。隨著人們對更高水平生活的追求，各種營養(yǎng)要素的均衡成為對食品的新的要求。谷子含人體所需的多種氨基酸，最為重要的一點是其所含的不飽和脂肪酸的含量很高，而這有正好是人體智力發(fā)育不可或缺的重要營養(yǎng)成分。我國谷子育種研究起步較晚，它的遺傳研

2、究相對落后，許多重要性狀的基因有待開發(fā)。分子標記輔助育種技術，是現(xiàn)在農業(yè)技術發(fā)展的趨勢，而獲得優(yōu)良農藝性狀的基因是這一技術的核心要求。一般來講現(xiàn)在獲得目標基因主要采取圖位克隆的策略。圖位克隆目的基因一般由基因遺傳圖譜的構建、物理圖譜的構建、高通量精細圖譜的構建、染色體登陸或步移、基因的鑒定五個要素組成。而這其中的關鍵技術染色體步移，需要大量的基因組DNA片段作為基礎。而BAC文庫正承擔了這一重要的角色。因此構建谷子的分子生物學技術平臺就

3、顯得十分重要，而基因組文庫正是這一平臺的核心。豫谷一號是我國自主育成的優(yōu)良品種，在組織培養(yǎng)、遺傳學研究的三體構建具有優(yōu)勢，美國的谷子基因組測序也采用豫谷1號，所以以其作為原始材料構建BAC文庫有著十分重要的現(xiàn)實意義。 本研究參考了前人關于TAC文庫及BAC文庫的構建方法，建立了自己的一套BAC文庫的構建體系。包括：從幼嫩的葉片中獲得高分子量的DNA、大量最佳部分酶切條件的確定、片段大小的選擇、高效的連接與轉化體系等。最終獲得了一

4、套轉化效率高，重組率低，空載率低的BAC文庫構建體系。由于BAC文庫的構建相當費時費力，其試驗的周期很長，且花費很大，因此每一步的試驗都要精益求精。在這一系列的步驟中第一步細胞核的提取及包埋最為關鍵的，它直接影響到后續(xù)工作的成敗。 利用所構建的體系，以peBloBAC11為載體，構建了豫谷一號的BAC文庫，到目前為止獲得了36096個克隆，并以單克隆的形式組裝保存。從所構建的文庫中隨機挑取50個克隆用減裂解法提取質粒，脈沖電泳進