杜仲法尼基焦磷酸合成酶基因超量表達對含膠細胞的影響研究.pdf

1、杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）系杜仲科Eucommiaceae杜仲屬Eucommia植物，既是中國特有的藥用植物，更是溫帶最具開發(fā)前景的膠源植物。本研究主要對杜仲遺傳轉化體系進行了優(yōu)化，構建了杜仲法尼基焦磷酸合成酶（EuFPS）基因植物表達載體，并導入杜仲。采用光鏡和透射電鏡觀察了轉EuFPS基因杜仲含膠細胞。獲得結果如下，
　?。?）EuFPS基因表達載體的構建
　　用限制性內切酶（EcoRI和Ba

2、mHI）雙酶切植物表達載體pSH737和含有目的基因的pUC-FPS，定向連接得到重組質粒pSH-FPS。該載體以CaM35S為強啟動子驅動EuFPS基因、報告基因gus和選擇標記基因NPTII。
　?。?）農桿菌介導的杜仲遺傳轉化
　　對影響杜仲遺傳轉化的因素進行優(yōu)化。結果表明，以15天苗齡杜仲無菌苗的下胚軸為外植體，在含50μmol/L乙酰丁香酮的MS重懸液中侵染8min，用無菌濾紙吸干，接入共培養(yǎng)基上，在28℃暗培養(yǎng)2

3、d后，置于含頭孢霉素300mg/L的MS＋6-BA（0.8mg/L）+NAA（0.1mg/L）培養(yǎng)基中脫菌生長3d，再接種至篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選條件是卡那霉素50mg/L。對279株抗性植株進行GUS組織活性檢測和PCR檢測，獲得17株轉基因植株。
　?。?）轉基因杜仲含膠細胞顯微觀察
　　通過光鏡和透射電鏡首次觀察了轉FPS基因杜仲含膠細胞，觀察發(fā)現轉EuFPS基因杜仲葉片中比野生型有更多的橡膠顆粒，這些橡膠顆粒在野生型