青蒿揮發(fā)油抗植物病原真菌活性及作用機理的初步研究.pdf

1、本課題通過對青蒿(Artemisia annua L.)揮發(fā)油進行GC/MS分析，確定了其主要化學組分；通過對青蒿揮發(fā)油抑制植物病原菌作用的研究，發(fā)現青蒿揮發(fā)油對受試的植物病原菌具有廣譜抗菌活性；通過與市售農藥多菌靈的抗菌活性比較，了解了青蒿揮發(fā)油的抗菌強度；并初步對青蒿揮發(fā)油的抗菌機理進行了研究和分析。從而為開發(fā)新的植物源抗菌劑奠定一定的基礎。
　　 實驗結果如下：
　　 ①采用氣質聯用(GC/MS)法對青蒿揮發(fā)油和青

2、蒿素母液揮發(fā)油的化學成分進行分析，發(fā)現青蒿揮發(fā)油的主要化學成分是樟腦(23.05％)、石竹烯氧化物(9.36％)、表藍桉醇(6.86％)、α-蛇床烯(5.11％)等；青蒿素母液揮發(fā)油的主要化學成分為戊烷(32.99％)、樟腦(22.22％、α-甜沒藥烯(5.20％)等。青蒿素揮發(fā)油和青蒿素母液揮發(fā)油的化學成分中有樟腦、石竹烯、β-蒎烯、龍腦等相同物質。
　　 ②采用生長速率法，研究了青蒿揮發(fā)油對十種受試植物病原真菌的抗菌活性，發(fā)

3、現在青蒿揮發(fā)油濃度為400μg/mL時，對三種植物病原真菌抑制率比較高，超過了40％；對四種真菌的抑制率為26.76％到39.91％；對其他的真菌也有一定的抑制；青蒿揮發(fā)油對四種受試病原真菌的毒力作用測定發(fā)現，青蒿揮發(fā)油對瓜類綿腐病菌(Pythium aphanidermatum)、小麥赤霉病病菌(Fusarium graminearum)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)和黃瓜尖孢鐮刀菌(Fusarium ox

4、ysporum f.sp cucumeris)的抑制中濃度(EC50)在776.50μg/mL到1637.45μg/mL之間。青蒿精油的主要成分樟腦對黃瓜尖孢鐮刀菌的EC50為2220.74μg/mL，高于青蒿揮發(fā)油。
　　 ③選用黃瓜尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumeris)作為抗菌機理研究的目標菌，研究了青蒿揮發(fā)油對植物病原真菌的抑制機理：通過對黃瓜尖孢鐮刀菌的生長觀察發(fā)現，揮發(fā)油能夠使

5、真菌的菌絲斷裂，致使生物量降低。通過電導率法和紫外分光光度法研究青蒿揮發(fā)油對真菌細胞膜系統(tǒng)的作用，結果顯示隨著揮發(fā)油濃度的增加，細胞膜傷害率(MIP)的值幾乎成指數曲線上升，在(1.OOmg/mL-1.60mg/mL)階段，MIP的提高幅度較低，在(1.60mg/mL-2.00mg/mL)階段，MIP有較大的提高；紫外分光光度法研究發(fā)現，隨著時間的增加，真菌中的核酸類物質泄漏量增大。據此推知青蒿揮發(fā)油能夠破壞黃瓜尖孢鐮刀菌(Fusari

6、umoxysporum f.sp cucumeris)的質膜，降低其選擇通透性，使細胞內的物質大量外滲。采用3,5-二硝基水楊酸法測定黃瓜尖孢鐮刀菌對營養(yǎng)物質的吸收利用時發(fā)現，空白培養(yǎng)基還原糖的含量一直較低于處理培養(yǎng)基，可見青蒿揮發(fā)油能夠影響菌絲體對還原糖的吸收利用。采用比色法測定青蒿揮發(fā)油對真菌細胞內琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的影響，在作用96h后，酶比活力比對照組低29.9％，說明青蒿揮發(fā)油對病原菌的氧化-還原系統(tǒng)造成了一定程度的破