端粒、端粒酶活性在氯化鑭誘導MDCC-MSB1細胞凋亡的機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著稀土在醫(yī)藥、生物化學等領域研究的不斷深入,其在生命科學中的地位日益重要。許多研究表明,一定濃度稀土具有顯著的抗腫瘤作用。端粒酶是一種依賴RNA的逆轉錄酶,能夠延長染色體末端的端粒長度,端粒酶活化是細胞永生化和腫瘤形成的關鍵步驟,惡性腫瘤細胞內(nèi)端粒酶活性升高,其中端粒酶逆轉錄酶(TERT)是端粒酶催化亞單位,其轉錄水平上調是端粒酶激活的關鍵步驟。雞馬立克氏病(MD)的許多特性與哺乳動物腫瘤的發(fā)生有相似之處,被作為研究腫瘤性疾病的良好模

2、型。本課題以馬立克氏病脾臟淋巴瘤繼代細胞系MDCC-MSB1(MSB1)為研究對象,在培養(yǎng)體系中加入3 mmol·L-1 LaCl3作用12h、24h、36h、48h,應用流式細胞術、電子顯微鏡、原位末端標記、DNA電泳分析、流式熒光原位雜交法、TRAP-PCR銀染法、實時定量PCR染料法等方法,從細胞形態(tài)學變化、DNA斷裂變化、細胞周期及細胞內(nèi)端粒長度變化、端粒酶活性以及chTERT mRNA表達水平等方面,探討端粒及端粒酶活性在La

3、Cl3誘導MDCC-MSB1腫瘤細胞凋亡中的作用,為臨床應用LaCl3治療MD及其他腫瘤性疾病提供理論依據(jù)。研究結果表明:
   1. 倒置顯微鏡下觀察MDCC-MSB1細胞生長情況,HE染色、AO/EB雙熒光染色、透射電鏡觀察3 mmol·L-1 LaCl3作用不同時間下誘導MDCC-MSB1細胞凋亡的形態(tài)學變化,結果表明LaCl3能誘導MDCC-MSB1細胞凋亡,且凋亡率具有時間依賴性;
   2. 應用DNA La

4、dder、堿性SCGE、TUNEL法檢測LaCl3對MDCC-MSB1細胞DNA的損傷作用,結果證實LaCl3能夠引起MDCC-MSB1細胞DNA損傷,且呈時間-效應關系。提示LaCl3致DNA損傷是其誘導腫瘤細胞凋亡的機制之一;
   3. 應用PI染色流式細胞術檢測細胞周期變化,結果表明LaCl3誘導MDCC-MSB1細胞發(fā)生G1期阻滯,而抑制其增殖,且抑制率具有時間依賴性;
   4. 應用Flow-Fish法檢測

5、細胞內(nèi)端粒長度,TRAP-PCR銀染法檢測端粒酶活性,實時定量PCR染料法檢測chTERT mRNA表達水平。結果顯示,LaCl3作用細胞不同時間后,細胞端粒酶活性下降,端粒長度縮短,chTERT mRNA表達減少,證實LaCl3可能通過端粒酶途徑誘導細胞凋亡。
   綜上所述,在實驗濃度范圍內(nèi),LaCl3可誘導MDCC-MSB1腫瘤細胞凋亡,呈明顯的時間-效應關系。LaCl3可通過下調MDCC-MSB1細胞的chTERT mR

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