水稻轉錄因子OsBP-73靶基因的初步篩選與水稻基因OsRRM及其同源基因OsRRMT相互作用因子的篩選.pdf

1、本論文主要包括以下兩方面內容： 1．水稻轉錄因子OsBP-73靶基因的初步篩選在基因的轉錄調控網(wǎng)絡中，轉錄因子(反式作用因子)與靶基因間的相互作用是構成基因表達調控網(wǎng)絡的基礎。它們的作用主要是使每一個基因在復雜的生命活動過程中適時、適地、適量地表達。鑒定出轉錄因子的靶基因可以幫助人們了解復雜生命活動的本質。 本論文研究所在實驗室以水稻蠟質基因上游-840bp-810bp之間一段能增強基因表達，并能與水稻胚乳核蛋白結合的3

2、1bp順序為魚餌，利用酵母單雜交系統(tǒng)從水稻cDNA表達文庫中篩選到3個編碼DNA結合蛋白的陽性克隆，OsBP-73(Oryza sativa Binding Protein)是其中的一個陽性克隆。OsBP-73基因不僅在水稻胚乳組織中表達，而且在根、莖和葉等組織中也都有表達；雙鏈RNA干擾實驗又觀察到水稻轉基因植株在營養(yǎng)生長期出現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象。這就暗示著轉錄因子OsBP-73不僅調控Wx基因表達，影響水稻胚乳組織中的直鏈淀粉含量，還可能

3、調控一些其它基因的表達，從而影響水稻的生長發(fā)育。本文對轉錄因子OsBP-73在水稻整個基因組的靶基因進行了初步篩選：首先在大腸桿菌中誘導表達獲得水稻轉錄因子OsBP-73的蛋白p512(全長)和p73(非全長，含有DNA結合功能域)，再用純化后的p73蛋白通過pull-down方法對其靶基因進行了初步篩選，獲得22個陽性克隆，為進一步研究轉錄因子OsBP-73參與的水稻轉錄調控網(wǎng)絡提供依據(jù)。 2．水稻基因OsRRM及其同源基因O

4、sRRMT相互作用因子的篩選本論文研究所在實驗室通過啟動子捕獲方法分離到一個在水稻胚乳中特異表達的基因OsRRM。OaRRM具有兩個RRM(RNA recognition motif)結構域、一個SPOC(Spen paralog and ortholog C-terminal)結構域和一個類似L-Zip(Leucinezipper)的結構域，是水稻中第一個被報道的Spen基因。Spen基因最早在動物中被命名，在動物中Spen基因家族的