家蠶幾丁質(zhì)酶基因選擇性剪切及表達(dá)的研究.pdf

1、幾丁質(zhì)是自然界中最重要的生物高分子之一。它是昆蟲(chóng)外骨骼的主要結(jié)構(gòu)組分，保護(hù)昆蟲(chóng)免于環(huán)境傷害和捕食，維持昆蟲(chóng)個(gè)體的形態(tài)，另一方面它能保護(hù)中腸的上皮細(xì)胞免于飲食成分的機(jī)械損傷和病原體造成的生物損傷，同時(shí)可作為消化腔調(diào)節(jié)滲透性，酶定位和消化產(chǎn)物。昆蟲(chóng)生長(zhǎng)和形態(tài)發(fā)生改變受幾丁質(zhì)酶的嚴(yán)格限制。昆蟲(chóng)在不同組織中不斷生產(chǎn)幾丁質(zhì)合酶和幾丁質(zhì)酶，幾丁質(zhì)合成和分解的協(xié)調(diào)需要發(fā)育過(guò)程中參與酶的嚴(yán)格調(diào)控。對(duì)昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)酶的結(jié)構(gòu)、形成、分類(lèi)和作用機(jī)理的研究非常有意

2、義。
　　 本論文在分析大量家蠶組織EST數(shù)據(jù)、基因組數(shù)據(jù)等的基礎(chǔ)上，利用RT-PCR法克隆了家蠶幾丁質(zhì)酶(BmCHT)基因的選擇性剪接體BmCH73，并分別驗(yàn)證了BmCHT基因的選擇性剪接體BmCHT1、BmCHT2和BmCHT4等3種不同mRNA選擇性剪接體的形式，發(fā)現(xiàn)BmCHT1的ORF全長(zhǎng)2337bp，編碼566個(gè)氨基酸，5’端非翻譯區(qū)(5’-UTR)和3’端非翻譯區(qū)(3’-UTR)分別為4bp和635bp。BmCHT2

3、的ORF全長(zhǎng)2850bp，編碼565個(gè)氨基酸，5’端非翻譯區(qū)(5’-UTR)和3’端非翻譯區(qū)(3’-UTR)分別為4bp和1151bp。BmCHT3的ORF全長(zhǎng)1706bp，編碼543個(gè)氨基酸，5’端非翻譯區(qū)(5’-UTR)和3’端非翻譯區(qū)(3’-UTR)分別為4bp和70bp。BmCHT4的ORF全長(zhǎng)2791bp，編碼544個(gè)氨基酸，5’端非翻譯區(qū)(5’-UTR)和3’端非翻譯區(qū)(3’-UTR)分別為4bp和1158bp。分析了BmC

4、HT基因的結(jié)構(gòu)，顯示BmCHT基因由10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子組成，10個(gè)外顯子大小分別為65、170、166、223、124、198、297、201、75、1339bp，9個(gè)內(nèi)含子分別長(zhǎng)1343、514、5499、724、1217、359、540、1150、861bp，內(nèi)含子和外顯子的邊界序列都符合典型的GT/AG規(guī)則。家蠶與赤擬谷盜，果蠅等昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)酶基因功能域的進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果顯示，昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)酶基因按功能域進(jìn)化樹(shù)分類(lèi)可分為五大類(lèi)，家蠶