利用OsPDCD5作為選擇標(biāo)記與目的基因共轉(zhuǎn)化法構(gòu)建無標(biāo)記轉(zhuǎn)基因水稻.pdf

1、水稻是我國乃至世界上最重要的糧食作物之一，保障水稻生產(chǎn)對(duì)確保我國糧食安全和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展有十分重要的戰(zhàn)略意義。發(fā)現(xiàn)和克隆水稻中具有重要功能性狀的基因，并通過轉(zhuǎn)基因等分子育種途徑應(yīng)用這些基因，可加速水稻育種進(jìn)程，取得水稻育種和生產(chǎn)的新突破。OsPDCD5和LRK1基因是復(fù)旦大學(xué)遺傳與育種實(shí)驗(yàn)室在水稻中定位克隆的兩個(gè)基因。OsPDCD5是一程序性死亡基因，在表達(dá)載體pCAMIBIA1304（簡(jiǎn)稱pC1304）中插入OsPDCD5，并用Osh

2、sp16.9啟動(dòng)子代替CaMV35S啟動(dòng)子，獲得熱激程序死亡基因的表達(dá)載體pC1304-Oshsp16.9-OsPDCD5，利用該載體與目的基因共轉(zhuǎn)化后重組，在42℃熱激處理下含有選擇標(biāo)記OsPDCD5的植株發(fā)生萎蔫、死亡，可獲得無標(biāo)記的轉(zhuǎn)目的基因水稻。將OsPDCD5的反義序列anti-OsPDCD5轉(zhuǎn)入水稻，可提高水稻耐鹽性。LRK1是富亮氨酸重復(fù)類受體蛋白激酶基因，轉(zhuǎn)LRK1基因水稻的露白要比非轉(zhuǎn)化的早，最終獲得的植株分蘗數(shù)、每穗

3、粒數(shù)和千粒重均有所增加。本試驗(yàn)利用基因槍法，將構(gòu)建的表達(dá)載體pC1304-Oshsp16.9-OsPDCD5分別與目的基因anti-OsPDCD5、LRK1共轉(zhuǎn)化秈稻品種9311，經(jīng)抗性篩選和轉(zhuǎn)基因鑒定，獲得轉(zhuǎn)anti-OsPDCD5陽性植株5株，轉(zhuǎn)LRK1陽性植株8株。陽性植株自交分離的T1代在42℃下熱激處理，最終獲得無選擇標(biāo)記的轉(zhuǎn)anti-OsPDCD5水稻植株2株，轉(zhuǎn)LRK1水稻植株3株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了利用表達(dá)載體pC1304-