白菜耐鋁基因型的篩選及耐鋁相關基因克隆.pdf

1、白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis Makino)屬于十字花科蕓薹屬白菜亞種，品種資源豐富，主要分布在我國南方地區(qū)，而南方酸性紅壤的鋁毒害卻嚴重影響了其產量和質量。本研究通過開展白菜耐鋁基因的克隆，以期通過基因工程手段獲得白菜耐鋁性新品種。這不僅為蕓薹屬作物的遺傳改良奠定了基礎，而且對實現(xiàn)紅壤資源的高效利用具有重要的意義。
　　 本論文以矮腳黃白菜自交系(97-3-2)、黃心烏自交系(0

2、03-27)、上海青自交系(98-4-2)、黃芽菜自交系(97-8-6)、白蔓菁蕪菁自交系(001-24)五個白菜自交系為材料，篩選白菜最耐鋁基因型和最不耐鋁基因型，采用cDNA-AFLP、Reverse Northernblot、RACE等優(yōu)勢互補的分子技術克隆白菜耐鋁基因，研究結果如下:
　　 (1)對五種白菜自交系種子進行不同程度的鋁脅迫處理，采用根相對伸長率測定法和蘇木精染色法篩選出最耐鋁基因型為矮腳黃，最不耐鋁基因型為

3、黃芽菜。
　　 (2)以矮腳黃自交系和黃芽菜自交系為材料，構建不同鋁脅迫時期的白菜根尖RNA混合池，通過cDNA-AFLP技術篩選出5個耐鋁相關的TDFs，reverse Northernblot驗證均呈陽性。
　　 (3)4個TDFs測序成功:H-A7T12長485bp，與粳稻群組cDNA克隆同源性100％，編碼的蛋白質與粳稻假擬蛋白的相似性100％;A-A8T17長271bp，與擬南芥煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結合域蛋白m

4、RNA同源性89％，編碼的蛋白質與擬南芥黃素腺嘌呤二核苷酸/煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結合氧化還原酶相似性85％; A-A19T12長301bp，與小鹽芥mRNA全長cds克隆同源性81％，編碼的蛋白質與擬南芥抗性蛋白相似性94％。A-A10T8長300bp，與擬南芥二氫硫辛酰胺S乙酰基移轉酶基因同源性100％，編碼蛋白與二氫硫辛酰胺S乙酰基移轉酶相似性100％，初步判斷其通過調控細胞物質代謝來增強白菜耐鋁性。
　　 (4) RACE