滲透脅迫信號傳導關鍵基因對黑穗醋栗遺傳轉化的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究以黑穗醋栗為試材進行組織培養(yǎng)和遺傳轉化的初步研究,該研究構建了osCDPK7基因和osMAPK4基因的植物表達載體;建立了黑穗醋栗莖尖再生體系;利用基因槍法和農桿菌介導法將osCDPK7基因和osMAPK4基因轉化黑穗醋栗,以期獲得轉基因植株,來增強作物抗逆性.該研究主要研究結果如下:1.載體構建構建了2個植物表達載體PBC7E12和PBME12.載體PBC7E12上帶有組成型啟動子E12調控的osCDPK7基因,植物篩選標記為n

2、ptⅡ基因.載體PBME12上帶有組成型啟動子E12調控的osMAPK4基因,植物篩選標記為nptⅡ基因.2.黑穗醋栗再生體系的建立(1)黑穗醋栗愈傷組織的誘導利用黑穗醋栗葉片、葉柄和莖段誘導愈傷組織,研究了不同PGR配比對黑穗醋栗愈傷組織誘導的影響,為下一步通過愈傷組織誘導不定芽奠定了基礎.(2)黑穗醋栗莖尖培養(yǎng)培養(yǎng)基的確定確定了黑穗醋栗莖尖最佳分化和繼代培養(yǎng)基為MS+1 mg/L BA,30g/L蔗糖,0.8﹪瓊脂,pH5.8.最佳

3、從生芽生根培養(yǎng)基為1/2MS,30g/L蔗糖,0.8﹪瓊脂,pH5.8.3.基因槍法對黑穗醋栗莖尖的遺傳轉化確定莖尖分化階段卡那霉素的篩選壓力為25mg/L.叢生芽生根階段卡那霉素篩選壓力為20mg/L.利用基因槍法轉化黑穗醋栗莖尖獲得抗性芽,抗性芽率為8.4﹪.4.農桿菌介導法對黑穗醋栗莖尖的遺傳轉化利用農桿菌介導法轉化黑穗醋栗莖尖獲得抗性芽,抗性芽率為10.5﹪.5.轉基因植株的分子檢測基因槍法轉化獲得的抗性植株,經PCR檢測,獲得

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