農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化及轉(zhuǎn)植酸酶基因大豆功能鑒定.pdf

1、本研究以品系12，冀豆12和豫豆22三個(gè)大豆品種為材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法對(duì)大豆子葉節(jié)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，設(shè)計(jì)了不同品種、不同共培養(yǎng)光照條件和不同共培養(yǎng)時(shí)間的正交試驗(yàn)將植酸酶基因phyA基因轉(zhuǎn)入大豆基因組內(nèi)，并得到了一批抗性植株。利用轉(zhuǎn)基因高代植株吉林35對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)行功能鑒定。
　　 (1)大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化：在本研究范圍內(nèi)大豆品種冀豆12子葉節(jié)在侵染以后，接種到pH5.4的共培養(yǎng)基上，在24℃，10 h光照的條件下共培養(yǎng)10d，誘

2、導(dǎo)篩選，獲得較高的抗性芽出芽率。
　　 (2)提取T6代轉(zhuǎn)基因植株mRNA，根據(jù)phyA基因設(shè)計(jì)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，對(duì)cDNA序列測(cè)定，測(cè)定的序列與GenBank中的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果表明其與目標(biāo)phyA基因(GenBank注冊(cè)號(hào)為：AF537344.1)同源性達(dá)到99％，說(shuō)明目的基因在轉(zhuǎn)基因大豆植株中穩(wěn)定遺傳和表達(dá)。
　　 (3)本試驗(yàn)以轉(zhuǎn)植酸酶基因大豆高代植株不同株系為供試材料，利用營(yíng)養(yǎng)液液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)基無(wú)

3、菌培養(yǎng)的方法，測(cè)定了不同轉(zhuǎn)化株系根系分泌植酸酶的能力和不同磷處理?xiàng)l件下對(duì)磷的吸收利用能力。結(jié)果表明，植酸鈉處理下，高代轉(zhuǎn)化株系根系分泌植酸酶能力高于對(duì)照植株，營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)條件下T6-12、T6-44、T6-66與對(duì)照差異顯著，超對(duì)照2.9-3.5倍；而在固體培養(yǎng)基無(wú)菌培養(yǎng)條件下T6-3、T6-12和T6-44與對(duì)照差異顯著，提高2.4-2.8倍。植酸磷處理下，轉(zhuǎn)化株系磷含量比對(duì)照株系高1.11-3.18倍，T6-12、T6-44分別是對(duì)照