兔可溶性細胞間粘附分子sicam酶聯(lián)免疫分析

1、<p>　　兔可溶性細胞間粘附分子(sICAM)酶聯(lián)免疫分析</p><p><b>　　試劑盒使用說明書</b></p><p>　　本試劑盒僅供研究使用。</p><p>　　檢測范圍： 96T</p>

2、<p>　　18ng/L -600 ng/L</p><p><b>　　使用目的：</b></p><p>　　本試劑盒用于測定兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中可溶性細胞間粘附分子 (sICAM)含量。</p><p><b>　　實驗原理</b></p><p>　　本試劑盒應用雙抗體夾心

3、法測定標本中兔可溶性細胞間粘附分子(sICAM)水平。用純化的兔可溶性細胞間粘附分子(sICAM)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入可溶性細胞間粘附分子(sICAM)，再與HRP標記的可溶性細胞間粘附分子(sICAM)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性細胞間粘附分子(sICAM)呈正

4、相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔可溶性細胞間粘附分子(sICAM)濃度。 </p><p><b>　　試劑盒組成 </b></p><p><b>　　標本要求 </b></p><p>　　1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行

5、試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融</p><p>　　2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。</p><p><b>　　操作步驟</b></p><p>　　標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。</p><p>　　加樣：

6、分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。</p><p>　　溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 </p><p>　　配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水3

7、0倍稀釋后備用</p><p>　　洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。</p><p>　　加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 </p><p><b>　　溫育：操作同3。</b></p><p><b>　　洗滌：操作同5。</b&g

8、t;</p><p>　　顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.</p><p>　　終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。</p><p>　　測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。</p><p>

9、;<b>　　操作程序總結(jié)：</b></p><p><b>　　計算</b></p><p>　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實

10、際濃度。 </p><p><b>　　注意事項</b></p><p>　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。</p><p>　　2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。</p><p>　　3．各步加樣

11、均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。</p><p>　　請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。</p><p>　　封板膜只限一次性使用

12、，以避免交叉污染。</p><p>　　6．底物請避光保存。</p><p>　　7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.</p><p>　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。</p><p>　　9．本試劑不同批號組分不得混用。</p><p><b>　　保存條件