栽培西瓜品牌抗枯萎病基因Fon-1定位.pdf

1、西瓜枯萎病是西瓜生產(chǎn)上的世界性病害，嚴(yán)重影響西瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)，其病原菌生理小種有4個(gè)，1號(hào)小種是國(guó)內(nèi)的主要生理小種。因此，開(kāi)展西瓜枯萎病菌生理小種1的抗病基因研究是解決西瓜枯萎病的首要突破口。
　　在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)栽培西瓜Calhoun Gray對(duì)枯萎病菌生理小種1有著高度抗性，且其抗性是由單個(gè)顯性基因Fon-1控制。本研究采用BSA分析方法對(duì)Fon-1基因進(jìn)行初步區(qū)間定位。依據(jù)11份栽培西瓜重測(cè)序信息，獲取位于初步定位區(qū)間

2、內(nèi)的候選SNP位點(diǎn)，并分別設(shè)計(jì)標(biāo)記。通過(guò)231株F2代分離群體和164份種質(zhì)資源驗(yàn)證，進(jìn)一步精細(xì)定位Fon-1基因。此外，通過(guò)初步定位區(qū)域基因注釋?zhuān)?duì)該區(qū)域內(nèi)的抗病同源基因進(jìn)行了克隆和比對(duì)多態(tài)性差異研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.利用BSA方法完成了西瓜枯萎病菌生理小種1抗性基因Fon-1的初步定位。通過(guò)對(duì)F2群體進(jìn)行枯萎病苗期接種表型鑒定，結(jié)合BSA法從西瓜950個(gè)SSR/Indel/dCAPS引物中，篩選出SSR標(biāo)記WMG

3、00291和dCAPS標(biāo)記197728_ fon2個(gè)與Fon-1基因連鎖的分子標(biāo)記，最終將Fon-1基因初步定位于1號(hào)染色體15cM范圍內(nèi)，研究結(jié)果為Fon-1基因的精細(xì)定位奠定了基礎(chǔ)。
　　2.利用生物信息學(xué)方法精細(xì)定位Fon-1基因。通過(guò)對(duì)11份栽培西瓜初步定位區(qū)間序列進(jìn)行BLAST，獲取與其抗、感表型完全吻合的SNP位點(diǎn)，開(kāi)發(fā)與Fon-1基因緊密連鎖的3個(gè)標(biāo)記，其最近遺傳距離達(dá)到0.8cM;利用164份西瓜種質(zhì)資源進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)

4、現(xiàn)，7716_fon和7419_fon均可高效地應(yīng)用于輔助選擇高抗Fon-1基因的西瓜育種工作。
　　3.候選Fon-1基因的獲取。依據(jù)西瓜基因組信息，對(duì)親本初步定位區(qū)間內(nèi)的抗病同源基因進(jìn)行全長(zhǎng)擴(kuò)增。通過(guò)序列比對(duì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FW-2基因編碼區(qū)存在SNP突變差異，初步認(rèn)為該基因?yàn)楹蜻xFon-1基因。
　　綜上所述，本研究精細(xì)定位了栽培西瓜抗枯萎病基因Fon-1，并開(kāi)發(fā)了與Fon-1基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。研究結(jié)果不僅為西瓜抗枯萎