棉酚對蛋雞肝細胞脂質代謝和抗氧化功能的影響.pdf

1、棉粕作為一種重要的蛋白原料，由于棉酚這一有毒物質的存在限制了其在飼料生產上的應用。本課題旨在研究棉酚對蛋雞肝臟脂質代謝、氧化功能和肝臟解毒等作用的影響，探討了其影響途徑與機制，為生產提供一定的指導意義。
　　試驗以體外培養(yǎng)原代肝細胞為試驗對象，3日齡的海蘭褐蛋雞，取肝臟分離培養(yǎng)原代肝細胞，培養(yǎng)至48h后用于正式試驗處理。原代培養(yǎng)的肝細胞不受體內神經內分泌系統(tǒng)的復雜影響，且能保持肝細胞的特異性功能以及對一些激素的反應性能，因此選擇原

2、代培養(yǎng)的肝細胞是研究肝臟脂質代謝及其他調控機制的極好模型。
　　試驗一:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細胞，分成4組，按0，2.5，5，10 mg/L添加棉酚的培養(yǎng)基處理24h。結果發(fā)現:與對照組相比，棉酚處理AST、ALT活性增強，細胞活性降低，VLDL分泌減少，MDA濃度增加;在棉酚處理中，隨著棉酚濃度的增加，AST活性和MDA濃度顯著增加，VLDL和細胞活性顯著降低。以上結果表明:棉酚能夠損傷肝細胞，影響肝臟脂質代謝，并且呈現劑量依賴性。

3、
　　試驗二:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細胞，分成3組，按0，2.5，5 mg/L添加棉酚的培養(yǎng)基處理。分別在處理后12、24、36、48h收集樣品，進行樣品分析。試驗結果發(fā)現:同試驗一相似與對照組相比，棉酚處理AST、ALT活性增強，細胞活性降低，VLDL分泌減少，MDA濃度增加;在處理時間上，隨著時間的延長，棉酚組AST活性變化類似呈拋物線在24-36h最顯著，細胞活性及VLDL水平在24h后都是顯著降低的，MDA的濃度在各個時間點都是

4、顯著增加的。以上結果表明:棉酚能夠損傷肝細胞，影響肝臟脂質代謝，并且呈現時間依賴性。
　　試驗三:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細胞，分成3組，按0，2.5，5 mg/L添加棉酚的培養(yǎng)基處理24h。結果發(fā)現:棉酚處理顯著降低了肝細胞VLDL的分泌，對Tg含量無影響;顯著降低脂肪代謝相關基因FAS、ACC、ME、ESR、SREBP-1c、ApoB100及VLDL-(Π)mRNA的表達，對LXR、MTP mRNA的表達無影響。顯著增加了細胞內氧化產

5、物H2O2、NO、MDA的濃度以及抗氧化酶CAT、SOD、GSH-Px活性，顯著降低細胞上清液中NO的濃度增加了CAT、SOD的活性，對H2O2、GSH-Px無影響;棉酚處理降低了肝細胞中Mn-SOD、Cu-Zn-SOD、GSH-Px和CAT mRNA的表達。同時棉酚處理對內質網應激相關基因GRP78及GRP94 mRNA的表達及GRP78蛋白水平的表達無顯著影響;但顯著調高了肝臟解毒相關基因CYP1A4、CYP1A5 mRNA的表達。

6、以上結果表明:棉酚因其毒性，在誘導肝臟啟動解毒體系的同時，會損傷肝細胞影響脂質代謝，它可能是通過影響脂質合成基因的表達降低脂質合成，通過影響SREBP-1c通路影響脂蛋白合成;棉酚在造成肝細胞氧化應激，同時又會增加機體的抗氧化功能。
　　試驗四:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細胞，分成6組，按對照組，棉酚組(5 mg/L)，雌二醇組（0.1nM），雌二醇組（1nM），棉酚+雌二醇組(5 mg/L gossypol+0.1 nM E2)，棉酚+雌

7、二醇組(5 mg/L gossypol+1nM E2)處理24h。結果發(fā)現，雌二醇與棉酚聯合處理對脂質合成代謝、內質網應激都沒有交互作用;但H2O2濃度顯著升高，CAT、GSH-Px的活性增強;同時，雌二醇處理降低了棉酚處理誘導的解毒基因CYP1A4、CYP1A5mRNA的表達。以上結果表明:棉酚與雌二醇對機體抗氧化功能存在相互促進效應，對機體解毒功能可能存在一定的頡頏效應。
　　棉酚增加機體氧自由基的濃度，造成細胞的氧化損傷;通