拉米夫定對禽白血病病毒的體內(nèi)外抑制效應及其應用.pdf

1、禽白血?。ˋvian leukemia，AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）引起的禽類多種良性和惡性腫瘤性疾病，臨床上多以免疫抑制、生長抑制和多器官組織出現(xiàn)腫瘤等為主要特征，其傳播主要通過垂直傳播。此外，由于一些弱毒疫苗中污染了ALV也給規(guī)模化養(yǎng)雞業(yè)和家禽疫苗產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的危害。目前尚無有效的商品化疫苗用于ALV的預防。ALV與人獲得性免疫缺陷綜合癥病毒（Human Immunodeficienc

2、y Virus，HIV）同屬于反轉錄病毒，鑒于通過多種藥物及其組合已經(jīng)較好的控制了HIV，我們有興趣知道類似的藥物是否可以輔助降低外源性ALV的感染率或用于去除疫苗中ALV污染。本研究觀察了逆轉錄酶抑制劑類藥物拉米夫定（Lamivudine，LAM）對ALV-J在體外和體內(nèi)的抑制作用并成功在模擬實驗中將新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）弱毒疫苗中ALV-A污染去除。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過

3、在不同藥物濃度培養(yǎng)液中細胞的連續(xù)傳代和CCK-8細胞毒性測定兩種方法確定了在培養(yǎng)液中添加不超5ug/ml的LAM對于DF-1細胞復制沒有影響。為了解不同濃度LAM對ALV-J在體外的抑制作用，實驗將J亞群rNX0101株接種到DF-1細胞上，然后在不同孔中分別使用20ug/ml，10ug/ml，5ug/ml，1ug/ml LAM的維持液培養(yǎng)以測定病毒復制動態(tài)。結果顯示，5ug/ml的安全用藥范圍內(nèi)，其抗病毒作用與其濃度呈正相關，即隨著藥

4、物濃度的增加，rNX0101的復制受到抑制作用隨之增強。按照類似操作觀察了LAM對ALV-A也有明顯的抑制作用。將人為污染ALV-A的NDV疫苗毒種經(jīng)過5 ug/ml的LAM連續(xù)干預2代后，經(jīng)接種SPF雞、病毒分離以及核酸檢測確認成功將其中人為污染的ALV去除。⑵經(jīng)細胞活性實驗和對病毒的抑制作用實驗確定5 ug/ml為ALV復制被顯著抑制但可以繼續(xù)復制的藥物濃度用于構建藥物選擇壓，在6孔細胞板中分別設置用藥組和空白組。連傳60代后，將原

5、始毒株、第六十代用藥組病毒及第六十代未用藥組病毒進行準確定量，以相同病毒量接種細胞，分別觀察同等接種劑量在添加0ug/ml和5 ug/ml的LAM后不同毒株復制曲線，結果顯示5ug/ml藥物濃度下，對原始毒株抑制作用遠遠高于對藥物選擇壓下的傳代毒株，證實出現(xiàn)了對LAM產(chǎn)生耐藥性的ALV-J毒株。⑶給不同組別的雞分別使用不同劑量的LAM后通過定期稱重并檢測針對NDV和AIV-H9的抗體評估不同劑量LAM對雞體重和免疫功能的影響，結果顯示分

6、別使用1mg，4mg和6mg的藥物組其體重以及AIV-H9和NDV抗體與未空白對照組相比差異均不顯著。將不同組別的雞人工攻毒后分別使用不同劑量的藥物連續(xù)用藥一周，從第一周起每只雞采集抗凝血檢測各組病毒血癥陽性率。結果顯示，未使用LAM的ALV-J感染組在感染后21d時有85.00％轉為病毒血癥陽性，并且直到105d時還維持在一個較高的病毒血癥水平（65.00%），而使用4mgLAM的感染組在63d時即轉為病毒血癥陰性。使用1mg LAM