通用效應因子tTF-SA選擇性誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞.pdf

1、選擇性誘發(fā)腫瘤組織血管血栓性栓塞從而導致腫瘤組織的缺血性壞死是一種很有前景的抗腫瘤策略。tTF融合蛋白利用導向載體將截短的組織因子tTF選擇性地定位于腫瘤組織血管，可以誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞，阻斷腫瘤營養(yǎng)物質和氧氣的供給，引發(fā)腫瘤缺血性壞死，發(fā)揮抗腫瘤作用。由于腫瘤組織單一靶點數量的有限性及表達的異質性，現(xiàn)使用單載體介導的腫瘤血管靶向治療效果并不理想，多靶點聯(lián)合治療是克服這一缺點的有效策略。我們設想以生物素-親和素體系作為載體與效應因子t

2、TF的橋聯(lián)系統(tǒng)，利用基因工程技術構建tTF與SA的融合蛋白作為通用效應因子，并與生物素化的腫瘤血管靶向載體聯(lián)合應用，實現(xiàn)多靶點的腫瘤組織血管靶向治療。 為了制備靶向通用效應因子tTF/SA融合蛋白，我們利用PCR技術分別克隆與合成截短組織因子tTF和鏈霉親和素SA的基因，重組tTF與SA的融合基因，并克隆至表達載體pET22b(+)，在E.coliBL21(DE3)中表達，鎳親和層析柱純化tTF/SA融合蛋白。結果表明，我們獲得

3、了序列正確的tTF/SA/pET22b(+)重組子，融合基因在E.coliBL21(DE3)中獲得高效表達。凝血實驗和FX活化實驗證實，純化后的融合蛋白具有活化FX和引起血液凝固的能力；ELISA實驗證實，融合蛋白能與生物素或生物素化的載體結合。 為了證實通用效應因子和生物素化載體的聯(lián)合治療的有效性，我們通過碳二亞胺交聯(lián)法分別制備整合素配體(RGD)3多肽和單鏈抗核抗體M7與生物素的交聯(lián)物，治療人胃癌MGC803腫瘤動物模型。生

4、物素化的載體(RGD)3和M7單獨或聯(lián)合注射后，再分別注射tTF/SA融合蛋白，連續(xù)給藥5天。結果顯示tTF/SA：M7-B組的抑瘤率為43.9％、tTF/SA：(RGD)3-B組的抑瘤率為27.7％、tTF/SA：[M7+(RGD)3]-B組的抑瘤率為59％。免疫組化結果顯示，(RGD)t3-B能選擇性定位于新生的腫瘤血管，M7-B能選擇性定位于變性和壞死的腫瘤細胞；病理學觀察發(fā)現(xiàn)，通用效應因子在生物素化靶向載體介導下能有效地誘發(fā)腫瘤

5、組織血管栓塞，導致腫瘤細胞變性壞死；而對正常組織細胞沒有毒副作用。 總之，利用基因工程技術表達的tTF/SA融合蛋白保持了組分tTF和SA的活性。在腫瘤動物模型治療實驗中，tTF/SA融合蛋白可以作為通用效應因子與生物素化載體(RGD)3-B或M7-B或(RGD)3-B+M7-B使用，并有效地誘發(fā)腫瘤組織血管血栓性栓塞、進而導致腫瘤組織細胞缺血壞死和抑制腫瘤生長。本研究證明tTF/SA通用效應因子與多種生物素化載體聯(lián)合使用可以實