PS-341治療小鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)肺損傷的實驗研究.pdf

1、重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是臨床常見的危重病,其發(fā)病急,進展快,患者早期即可出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory responsesyndrome SIRS),導(dǎo)致遠離臟器功能不全。急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷(acutepancreatitis associated lung injury,APALI),是SAP早期最常見、最嚴(yán)重的并發(fā)癥。75％的SAP患者早期

2、即可發(fā)生,臨床上表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合癥,死亡率高達30～50%。尋找有效的治療藥物,減輕SAP引起的肺損傷和多臟器功能不全,降低SAP的死亡率,一直是臨床研究的熱點。重癥急性胰腺炎的發(fā)病機制復(fù)雜,經(jīng)過大量的基礎(chǔ)研究,目前較為一致的觀點是:胰蛋白酶在腺泡中異常活化引起胰腺腺泡細胞損傷,NF-kB活化是胰酶異?；罨淖钪匾氖紕訖C制;強烈的胰腺局部炎癥反應(yīng)釋放出來的大量炎癥介質(zhì)和細胞因子導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征;過度的全身炎癥反應(yīng),導(dǎo)致遠離

3、器官損傷和多臟器功能不全。肺部是最早和最常受累及的胰外器官,有研究表明中性粒細胞滲出、聚集和粘附分子的過度表達是重癥急性胰腺炎引起肺損傷的重要原因。因此,如能有效降低粘附分子的表達和減少中性粒細胞滲出,則有可能減輕重癥急性胰腺炎引起的肺損傷。PS-341又稱硼替佐米,是目前唯一一個批準(zhǔn)進入臨床的蛋白酶體抑制劑。PS-341能夠特異性抑制26S proteasome活性,使Ⅰ-kBα的降解減少,從而間接抑制了NF-kB活化,使多種炎癥介質(zhì)

4、、細胞因子及粘附分子的表達和釋放降低。在急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷的發(fā)病機制中,NF-kB持續(xù)活化起著關(guān)鍵性作用。因此,用PS-341進行治療有可能減輕急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷。本實驗用腹腔內(nèi)注射雨蛙素及脂多糖制作小鼠重癥急性胰腺炎模型,隨機分為三組:PS-341治療組、模型對照組和空白對照組,最后一次注射雨蛙素2小時后比較各組小鼠間血清淀粉酶、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、乳酸脫氫酶(LDH)、髓過氧化物酶(MPO)、肺臟病理改變及細胞粘附分子(

5、ICAM-1、E-selectin、P-selectin)的表達差異,探討PS-341對小鼠急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷的治療作用。實驗方法1、動物來源:清潔級雌性ICR小鼠60只,體重19～21g,由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物中心提供。2、采用腹腔內(nèi)注射雨蛙素及脂多糖制作重癥急性胰腺炎模型:造模前12小時,小鼠禁食不禁水。每隔1小時腹內(nèi)注射雨蛙0.2ml(50ug/kg)共7次,首次注射雨蛙素后5小時腹腔注射脂多糖10mg/kg。3、實驗小鼠隨機分

6、三組:PS-341治療組20只、空白對照組20只、模型對照組20只模型對照組:注射脂多糖前1/2小時腹腔注射50%DMSO0.2ml(0.9%的NS稀釋)空白對照組:用生理鹽水代替雨蛙素和脂多糖,依照同樣的方法腹腔注射。PS-341治療組:注射脂多糖前1/2小時腹腔注射PS-341(0.5mg/kg)0.2ml4、小鼠制模后禁食不禁水,觀察2小時。5、戊巴比妥鈉(50mg/kg)0.2ml腹內(nèi)注射后麻醉,右側(cè)頸靜脈切開取血,提取血清置-

7、20℃冰箱保存;取胰腺及肺組織,一部分用10%福爾馬林溶液固定,一部分置與液氮中,然后-80℃冰箱保存。6、用自動生化儀檢測血清淀粉酶、CRP、LDH,比較各組水平差異;7、胰腺標(biāo)本制備石蠟切片,常規(guī)HE染色,光鏡下比較各組胰腺和肺損傷情況;8、凍存的肺組織取出測MPO水平,用RT-PCR方法檢測標(biāo)本中所含的黏附分子水平(ICAM-1、E-selectin、P-selectin),比較各組差異。結(jié)果1、淀粉酶、CRP和LDH檢測結(jié)果:模

8、型對照組淀粉酶、CRP和LDH水平遠高于空白對照組(p＜0.01);PS-341治療組淀粉酶、CRP和LDH水平低于模型對照組(p＜0.05);2、病理改變:肉眼觀察:PS-341治療組:腹腔內(nèi)無或少量腹水,無皂化斑,胰腺和肺臟輕至中度水腫;模型對照組:腹腔內(nèi)有大量腹水,有較多皂化班形成,胰腺廣泛中重度水腫,局部腺葉出血壞死,肺臟充血明顯,部分肺臟有出血空白對照組:腹腔內(nèi)無腹水,無皂化斑,胰腺僅表現(xiàn)為輕度水腫或基本正常,肺臟無殊光鏡下觀

9、察結(jié)果:胰腺:PS-341治療組:間質(zhì)增寬;間質(zhì)、腺體間和血管周圍少量炎細胞浸潤模型對照組:間質(zhì)明顯增寬,腺葉結(jié)構(gòu)破壞,片狀出血、壞死;間質(zhì)、腺體間和血管周圍有多量炎細胞浸潤空白對照組:間質(zhì)略增寬,小葉結(jié)構(gòu)完整,無出血、壞死改變,無炎細胞浸潤肺臟:PS-341治療組:間質(zhì)水腫,有少量炎細胞浸潤,肺泡內(nèi)無出血,無透明膜形成模型對照組:間質(zhì)明顯水腫,微血管周圍有多量炎細胞浸潤,肺泡內(nèi)出血,透明膜可見空白對照組:間質(zhì)無水腫,肺泡內(nèi)無出血,血管

10、周圍極少量炎細胞浸潤3、MPO水平(肺臟):模型對照組MPO水平遠高于空白對照組(p＜0.05);PS-341治療組MPO水平低于模型對照組(p＜0.05);4、粘附分子水平(ICAM-1、E-selectin、P-selectin)(肺臟):模型對照組黏附分子水平高于空白對照組(p＜0.05);PS-341治療組黏附分子水平低于模型對照組(p＜0.05);結(jié)論1、PS-341可以降低SAP小鼠血清淀粉酶、CRP和LDH水平。2、PS-