紋狀體立體定向注射Taclo帕金森病大鼠模型的建立.pdf

1、研究背景：
　　三氯乙烯(Trichtoroethylene、TCE)是一種含氯有機(jī)物，具有脂溶性高、易混溶于有機(jī)物及水的物理特性，工業(yè)上被作為脫脂劑、萃取劑廣泛使用，醫(yī)學(xué)上也曾用作麻醉劑、流產(chǎn)劑及其它藥物的制備。2008年，美國(guó)肯塔基大學(xué)醫(yī)學(xué)院Guoying Bing與Don Gash教授在一項(xiàng)帕金森病臨床試驗(yàn)中偶然發(fā)現(xiàn)，低濃度的三氯乙烯長(zhǎng)期作用于人體可使其神經(jīng)功能出現(xiàn)異常，表現(xiàn)為帕金森病綜合征癥狀，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)遲緩，協(xié)調(diào)性、穩(wěn)定性

2、差等神經(jīng)功能退行性改變，部分發(fā)展成為典型的帕金森病(Parkinson's disease、PD)。隨后Guoying Bing教授通過(guò)對(duì)大鼠人工喂養(yǎng)TCE，成功的構(gòu)建出帕金森病大鼠模型，并且在研究中發(fā)現(xiàn)了紋狀體黑質(zhì)纖維變性和多巴胺能神經(jīng)元破壞。動(dòng)物體內(nèi)TCE的代謝途徑可以分為兩種:細(xì)胞色素P450氧化途徑和谷胱甘肽結(jié)合途徑。1-三氯甲基-1，2，3，4-四氫化-β-咔啉(1-Trichloromethyl-1，2，3，4-Tetrah

3、ydro-Carboline，TaClo)是TCE盼體內(nèi)代謝產(chǎn)物之一，可經(jīng)氧化途徑在動(dòng)物體內(nèi)形成。由于Taclo與公認(rèn)的可導(dǎo)致帕金森病的化合物1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)在化學(xué)結(jié)構(gòu)方面有共同之處，因此我們考慮Taclo可能在TCE引起的帕金森病發(fā)病過(guò)程中扮演著重要的角色。
　　目的：觀察大鼠紋狀體立體定向注射Taclo對(duì)黑質(zhì)內(nèi)多巴胺神經(jīng)元的損毀作用，構(gòu)建帕金森病大鼠模型，為進(jìn)一步研究Taclo的作用機(jī)制

4、奠定基礎(chǔ)。
　　方法：60只雄性Wistar大鼠被隨機(jī)的分為兩組，聚乙二醇(PEG)組和Taclo組，每組30只，使用腦立體定向儀分別將PEG及溶于PEG的Taclo注射到兩組大鼠右側(cè)紋狀體中。術(shù)后2周及1月以阿撲嗎啡誘導(dǎo)大鼠旋轉(zhuǎn)，用自動(dòng)視頻追蹤系統(tǒng)記錄30min內(nèi)大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡。術(shù)后1個(gè)月處死大鼠，行酪氨酸羥化酶(TH)免疫組化染色、高效液相色譜分析及Western-blotting蛋白測(cè)定。
　　結(jié)果：阿撲嗎啡誘導(dǎo)后，Ta

5、clo組可見(jiàn)24只大鼠出現(xiàn)恒定向左側(cè)旋轉(zhuǎn)的行為學(xué)表現(xiàn)，并且旋轉(zhuǎn)的速度大于210r/30min，自動(dòng)視頻追蹤系統(tǒng)記錄大鼠30min運(yùn)動(dòng)軌跡發(fā)現(xiàn)大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡稀疏，免疫組化顯示PD大鼠右側(cè)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元數(shù)量比左側(cè)及PEG組兩側(cè)明顯減少(P＜0.05)，高效液相色譜分析顯示PD大鼠右側(cè)紋狀體區(qū)多巴胺含量明顯減少(P＜0.05)，Western-blotting結(jié)果顯示PD大鼠右側(cè)黑質(zhì)區(qū)capase-3及cox-2表達(dá)明顯增加(P＜0.05)。