Tim-3在肝細胞性肝癌中的表達及意義.pdf

1、背景與目的:
　　原發(fā)性肝癌(primary liver cancer)是臨床常見的惡性腫瘤之一,目前在世界范圍內其發(fā)病率位居于惡性腫瘤中的第五位,而其死亡率位居第三位。全世界每年約有75萬例肝癌新確診病例,70萬例死亡病例,其中約有一半發(fā)生在中國。肝細胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作為最主要的組織學亞型占原發(fā)性肝癌的70-85％。約有78%的HCC是源于HBV(53%)或HCV(25%)所致

2、的慢性感染。近年來肝癌的治療研究取得了較大的進展,但因為其高轉移率和高復發(fā)率的特性,總體預后仍然不樂觀。腫瘤的生物學特性是影響預后的最根本因素,而癌的轉移復發(fā)恰是癌生物學特性最集中的表現(xiàn)。因而,對肝癌細胞增殖、侵襲轉移相關領域的實驗研究不但具有重要的理論意義,而且具有重要的科研和臨床應用價值。
　　T細胞免疫球蛋白及粘蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain3,Tim-3)最早被發(fā)現(xiàn)

3、其表達于終末分化的Thl細胞上,是區(qū)分Thl和Th2細胞的表面標志。進一步研究發(fā)現(xiàn)在CD8T細胞、調節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Treg)、Th17、樹突狀細胞(dendritic cells,DC)、自然殺傷細胞(natural killer cell,NK)、巨噬細胞、肥大細胞和其他淋巴細胞亞群都存在Tim-3的表達,并對細胞因子分泌起著重要的調節(jié)作用,從而在多細胞水平上參與腫瘤免疫。目前的研究證明Tim-3的表

4、達與腫瘤相關的免疫抑制顯著相關。近來,Tim-3被發(fā)現(xiàn)反常表達于黑色素瘤細胞,并使腫瘤細胞粘附力降低,促進腫瘤進展。Zhuang等也發(fā)現(xiàn)tim-3高表達于非小細胞肺癌,且這種表達是患者的獨立預后因素。但Tim-3與HCC的關系報道較少,尚需進一步研究。
　　本課題旨在研究探討Tim-3在HCC組織中的表達,分析其與患者臨床病理特征的關系,探尋其臨床意義;并深入研究Tim-3在HCC中的表達及其對腫瘤進展的作用。有助于闡明Tim-3

5、在肝癌診斷、治療、預后判斷中的應用價值。
　　方法:
　　1.標本收集:
　　收集2012年10月至2013年8月臨床手術切除的肝細胞肝癌組織標本20例,包括癌組織及對應癌旁組織;手術切除的血管瘤或肝外傷切除的正常肝臟組織標本4例。實驗室凍存的肝癌細胞株2組(HepG2、SMMC7721),人正常肝細胞系1組(LO2)。
　　2.Tim-3在HCC中的表達檢測:
　　(1)采用熒光實時定量PCR(Real-

6、time fluorescent quantitive polymerase chain
　　reaction,Real-time PCR)和蛋白質印跡(Western blot)方法檢測Tim-3在20例肝癌組織、對應癌旁組織及4例正常肝臟組織中的表達。對比其在上述組織間的表達差異;分析Tim-3在肝癌組織中的表達情況與患者臨床病理學特征的相關性。
　　(2)采用Real-time PCR和Western blot方法分別

7、從mRNA水平和蛋白質水平檢測肝癌細胞株HepG2、SMMC7721與人正常肝細胞株LO2中Tim-3的表達情況,并選取表達最顯著的細胞株進行下一步實驗。
　　3.Tim-3與肝癌細胞的增殖、遷移等生物學特性的關系研究:
　　應用RNA干擾技術轉染肝癌細胞株下調Tim-3的表達,采用MTT實驗、細胞劃痕實驗檢測Tim-3對肝癌細胞增殖、遷移能力的影響。
　　結果:
　　1.肝細胞性肝癌組織中Tim-3的表達明顯高

8、于癌旁組織及正常肝組織,肝癌組織中Tim-3的表達與腫瘤病理分級、門靜脈癌栓存在相關性,在患者不同年齡、性別、AFP、HBV感染、肝硬化、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、Child-Pugh分級、TNM分期等的表達無差異性。
　　2.人HCC細胞株HepG2、SMMC7721中Tim-3 mRNA和蛋白的表達均較正常肝細胞株L02明顯增高。轉染Tim-3 siRNA后,肝癌細胞株HepG2中Tim-3蛋白水平表達明顯降低。與對照組比較,細胞的