人血管內(nèi)皮生長因子shRNA對肝癌細胞增殖的影響.pdf

1、目的：本研究旨在(1)運用已構(gòu)建好的VEGFshRNA真核表達載體轉(zhuǎn)染肝癌細胞系SMMC-7721，檢測其對肝癌細胞系SMMC-7721表達VEGF蛋白的抑制能力；(2)通過檢測轉(zhuǎn)染VEGFshRNA真核表達載體前后肝癌細胞系SMMC-7721的增殖及細胞的克隆形成能力的變化，探討VEGFshRNA對肝癌細胞系SMMC-7721增殖的影響；(3)通過觀察VEGFshRNA真核表達載體對裸鼠的負瘤局部注射后負瘤的生長變化，探討VEGFsh

2、RNA對肝細胞癌瘤體的影響。 方法：(1)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達載體和VEGFshRNA真核表達載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細胞系SMMC-7721，ELISA法檢測轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細胞系SMMC-7721VEGF蛋白表達水平；(2)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達載體和VEGFshRNA真核表達載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細胞系SMMC-7721，流式細胞儀對轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細

3、胞系SMMC-7721進行細胞周期分析；(3)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達載體和VEGFshRNA真核表達載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細胞系SMMC-7721，MTT法檢測轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細胞系SMMC-7721生長曲線變化；(4)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達載體和VEGFshRNA真核表達載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細胞系SMMC-7721，軟瓊脂克隆形成試驗檢測轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細胞系S

4、MMC-7721單細胞克隆形成能力；(5)制備負瘤裸鼠，PBS、nosilienceshRNA真核表達載體和VEGFshRNA真核表達載體分別進行腫瘤局部注射，觀察腫瘤生長變化。 結(jié)論：(1)VEGFshRNA能有效的抑制人肝癌細胞系SMMC-7721VEGF蛋白表達水平； (2)VEGFshRNA使細胞G1期細胞增多，S期細胞減少，細胞生長速度減慢，單個細胞的克隆形成能力明顯減弱；(3)VEGFshRNA使裸鼠腫瘤生長變