針對膠質(zhì)瘤病因分子的靶向治療實驗研究.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤，傳統(tǒng)的手術(shù)輔以放化療等治療手段盡管可以緩減病情延長患者的生存期，但預(yù)后仍然不理想。分子靶向治療是近年來腫瘤治療的一個閃光點，憑著它的特異性和有效性，目前已成為國內(nèi)外腫瘤治療的研究熱點。本實驗利用CDC2 shRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體和EGFR抑制劑吉非替尼分別作用于人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251，觀察兩者對U251細胞生長和凋亡的影響，旨在為CDC2和EGFR基因作為膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)基因在膠質(zhì)瘤治療方面

2、的應(yīng)用價值提供實驗依據(jù)。 第一部分：CDC2基因沉默與人腦膠質(zhì)瘤細胞增殖抑制目的：細胞周期蛋白依賴性激酶CDC2又稱CDK1激酶，是細胞周期G2/M點的核心調(diào)控分子。目前已知CDC2過量表達于包括膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤組織，并且與腫瘤的分期、分級及預(yù)后相關(guān)。本實驗是在膠質(zhì)瘤細胞系SHG44-CDC2-mRNA干擾實驗取得成功的基礎(chǔ)上的擴大研究，旨在為CDC2作為多種類型膠質(zhì)瘤基因治療的靶分子提供實驗依據(jù)。 方法：利用本實驗

3、室基因重組構(gòu)建的CDC2 shRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體對體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251進行轉(zhuǎn)染。倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)和數(shù)量的變化；RT-PCR及熒光實時定量PCR檢測CDC2-mRNA表達；Western blot檢測CDC2蛋白表達；流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡變化；透射電子顯微鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251在轉(zhuǎn)染針對CDC2的shRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體48小時后，貼壁生長的細胞逐漸漂浮，生長抑

4、制和CDC2mRNA下調(diào)均達98％以上、蛋白表達下調(diào)達92％以上，同時出現(xiàn)了明顯的細胞G2/M期阻滯，細胞凋亡由0.57％上升到13.01％，并且超微結(jié)構(gòu)受損明顯。 結(jié)論：細胞周期蛋白依賴性激酶CDC2基因是多種類型膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生發(fā)展的病因分子之一，敲低其表達，腫瘤細胞的惡性增殖得到控制，表明CDC2可作為多種類型膠質(zhì)瘤基因治療的靶分子。 目的：探討表皮生長因子受體(epidermal growth factor rec

5、eptor，EGFR)抑制劑吉非替尼(gefitinib，ZD1839)對人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251增殖和凋亡的影響，旨在為EGFR能夠作為膠質(zhì)瘤治療的靶分子提供實驗依據(jù)。 方法：以不同濃度的吉非替尼作用于體外培養(yǎng)的U251細胞48小時，MTT法檢測細胞生長的抑制情況，流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡的變化。 結(jié)果：吉非替尼能夠明顯抑制人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251細胞的生長，并且呈劑量依賴性，半數(shù)抑制濃度IC50為18.99μM，