全氟化碳對缺血再灌注誘導的肺泡上皮細胞凋亡損傷的保護作用和機制研究.pdf

1、目的：
　　 探討凋亡在肺缺血再灌注損傷中的作用機制,對全氟化碳的生物保護效應及可能的機制有更深入的理解和闡釋,為臨床應用全氟化碳治療肺缺血再灌注損傷提供較為客觀和更充分的理論依據,以期有效改善肺移植手術中供體肺保護,研究改良手術中供體肺保存液,為臨床肺移植手術和體外循環(huán)手術地應用提供更大范圍的保障。
　　 方法:
　　 1.建立肺缺血再灌注的細胞模型。A549細胞在不同的時間(6h、12h)被保存于100％氧氣

2、及4℃的環(huán)境中,并加入低鉀右旋糖酐培養(yǎng)以模擬缺血的過程。繼而轉入放有10％胎牛血清的DMEM／F-12培養(yǎng)基的溫暖環(huán)境(37℃)中孵育2h以模擬再灌注情況。
　　 2.全氟化碳對缺血再灌注損傷誘導的A549細胞凋亡損傷的保護作用。應用流式細胞儀(FCM)檢測細胞凋亡率化及western blotting法檢測caspase-3蛋白的表達。將培養(yǎng)傳代的A549細胞分為四組:①對照組(control group)組:不作任何干預；②

3、IRI組:僅行缺血再灌注處理；③PFC(全氟辛烷)組:按30％體積比(PFC:培養(yǎng)液)在細胞培養(yǎng)液中加入全氟辛烷,仍置于二氧化碳孵箱內孵育；④PFC+IRI組:按30％體積比(全氟化碳:培養(yǎng)液及全氟化碳:保存液)在缺血再灌注階段加入全氟辛烷。FCM缺血階段時間取6h和12h兩個時間點的樣本。
　　 結果:
　　 1.細胞凋亡的FCM結果:肺缺血再灌注條件作用于A549細胞6h和12h后的早期細胞凋亡率分別為10.01％和

4、14.21％；晚期凋亡和壞死率分別為4.93％及5.49％；細胞存活率分別為84.61％與79.59％。即隨著時間的推移,細胞凋亡壞死率逐漸上升,而其細胞存活率逐漸下降。與對照組、全氟化碳組和全氟化碳+缺血再灌注組比較,缺血再灌注損傷作用于A549細胞后的6小時,12小時,其早期細胞的凋亡率、晚期細胞凋亡和壞死率明顯升高,存活率明顯下降,而且12小時明顯重于6小時；與對照組比較,全氟化碳兩個時相組的細胞凋亡率和存活率的差異沒有統計學意義

5、,而且兩組之間差異也無統計學意義；與對照組和全氟化碳組比較,全氟化碳+缺血再灌注組A549細胞的12小時早期凋亡率升高,存活率下降,即全氟化碳能明顯對抗缺血再灌注誘導的凋亡作用,但不能完全阻斷缺血再灌注對細胞的促凋亡效應。
　　 2.蛋白免疫印跡法測得結果:缺血再灌注條件作用于A549細胞0.5,2,6,12h見caspase-3前體降解的17 kDa和11 kDa兩個活性片段；全氟化碳單獨作用于A549細胞,該蛋白的活性和水平

6、無明顯影響；在全氟化碳+缺血再灌注組,caspase-3蛋白的活性明顯下降,提示全氟化碳能夠顯著抑制缺血再灌注損傷誘導的該蛋白的激活從而阻斷缺血再灌注損傷誘導的細胞凋亡效應。
　　 結論:
　　 1.缺血再灌注條件下可以誘使A549細胞產生凋亡的損傷改變,這種誘導效果與時間成正比。
　　 2.全氟化碳單獨與A549細胞共同孵育,不誘使凋亡損傷效果地發(fā)生,當在缺血再灌注條件下孵育A549細胞時加入全氟化碳,則可以明