PI3K抑制劑wortmannin對(duì)卵巢癌細(xì)胞Survivin和Caspase-3蛋白活性的影響.pdf

1、目的：
　　 卵巢癌是女性生殖器常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，因缺乏有效的早期診斷方法，診斷時(shí)多為晚期，大量國(guó)內(nèi)外臨床資料顯示，卵巢癌患者的五年生存率僅為25％～30％，隨著近代宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌診治進(jìn)展，卵巢癌已成為嚴(yán)重威脅婦女生命和健康的主要腫瘤，究其原因，是70％以上的卵巢癌診斷時(shí)，病變范圍已超出卵巢，發(fā)生轉(zhuǎn)移。卵巢惡性腫瘤的治療原則是手術(shù)為主，輔以化療、放療及其他綜合治療，其中化療為主要的輔助治療手段。因卵巢惡性腫瘤對(duì)化療較敏

2、感，即使已廣泛轉(zhuǎn)移也能取得一定療效，既可用于復(fù)發(fā)，也可用于術(shù)后有殘留癌灶患者，可緩解癥狀延長(zhǎng)存活期。
　　 但是近年來(lái)隨著卵巢癌化療耐藥問(wèn)題的不斷出現(xiàn)，嚴(yán)重影響了卵巢癌的治療效果。大量對(duì)卵巢癌細(xì)胞系和動(dòng)物模型的研究已經(jīng)證明，PI3K/AKT信號(hào)通路異?；罨c卵巢癌化療耐藥有關(guān)，抑制該通路可以明顯增加化療藥物的抗腫瘤效應(yīng)，而且副作用亦有所減小。臨床和實(shí)驗(yàn)研究證明wortmannin是PI3K的特異性抑制劑，它能間接抑制痛細(xì)胞的訊息

3、傳遞，使得癌細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)而讓腫瘤變小或消失。本實(shí)驗(yàn)擬觀察wormannin對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，分析其抑制腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)經(jīng)PI3K抑制劑wortmannin作用后卵巢癌細(xì)胞系CAOV3中凋亡調(diào)控因子（survivin蛋白）和半胱氨酸門冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3蛋白）的表達(dá)及變化情況，初步探究PI3K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路影響卵巢癌細(xì)胞增殖及凋亡的機(jī)制，為卵巢癌的治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

4、>　　 方法：
　　 1、實(shí)驗(yàn)方法
　　 應(yīng)用western blot方法檢測(cè)經(jīng)不同濃度wortmannin(0、100、300、500nmol/L)作用以及作用不同時(shí)間(0、6、12、36h)后，卵巢癌細(xì)胞系CAOV3中survivin蛋白及caspase-3蛋白的表達(dá)及變化趨勢(shì)，同時(shí)檢測(cè)二者之間的相關(guān)性。
　　 2、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及相關(guān)分析，

5、P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)取三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值。
　　 結(jié)果：
　　 1、藥物濃度梯度實(shí)驗(yàn)：卵巢癌細(xì)胞系CAOV3經(jīng)不同濃度wortmannin作用后，caspase-3蛋白隨著wortmannin作用濃度增加呈遞增式表達(dá)，而survivin蛋白隨著wortmannin作用濃度增加表達(dá)則逐漸減弱，100nmol/L wortmannin組survivin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度約為0nmol/L組的1/2，兩

6、組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異較survivin蛋白其他相鄰組間差異更為明顯（P＜0.01）。
　　 2、藥物時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)：卵巢癌細(xì)胞系CAOV3經(jīng)300nmol/L wortmannin作用不同時(shí)間后，caspase-3蛋白隨著wortmannin作用時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增式表達(dá)，作用累及12h時(shí)，caspase-3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度約為0h的2.5倍；Survivin蛋白則隨著wortmannin作用時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減弱。
　　 3、cas

7、pase-3與survivin蛋白在卵巢癌細(xì)胞系CAOV3中的表達(dá)具有對(duì)應(yīng)性，隨著wortmannin作用濃度增加、作用時(shí)間延長(zhǎng)，caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)，survivin蛋白表達(dá)下調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 在卵巢癌細(xì)胞系CAOV3中，wortmannin增強(qiáng)凋亡蛋白caspase-3表達(dá)，且與作用濃度及作用時(shí)間呈正相關(guān)；wortmannin抑制存活蛋白survivin表達(dá)，且與作用濃度及作用時(shí)間呈負(fù)相關(guān)；應(yīng)用wo