食管癌蛋白質芯片的研究與應用.pdf

1、本研究旨在建立一種高敏感度的非侵入性檢測方法，以便在高危人群中篩查食管癌前病變，以期降低食管癌的發(fā)病率和死亡率。 研究方法：挑選16個SEREX技術篩選、鑒定并經統(tǒng)計學分析優(yōu)化的食管癌前相關抗原，采用pET-30b(+)原核表達載體將它們在E.coli中進行表達，采用His-Tag親和層析和SDS-PAGE制備膠電泳純化表達產物，經復性后用SDS-PAGE和WesternBlot鑒定蛋白純度。結果顯示，16個抗原經表達、純化后獲

2、得了純度大于90﹪的純化蛋白。采用接觸式芯片點樣儀將純化的16個抗原蛋白點樣于醛基化的玻璃片基上制備蛋白芯片。采用這種食管癌抗原蛋白芯片對241例食管癌和234例正常人血清、50例食管癌前輕度不典型增生、50例中度不典型增生、50例重度不典型增生、35例原位癌及50例高發(fā)區(qū)正常人血清，以及323例食管癌前血清和550例食管癌高發(fā)區(qū)現(xiàn)場普查人群血清中的IgG和IgM型自身抗體進行了檢測。同時通過免疫組化、ELESA法對這一方法進行了分析。

3、 研究結果：結果顯示該芯片檢測的重復性好，大部分樣本(82﹪的孔內、78﹪的片間、72﹪的批間)的誤差均小于15﹪。這種抗原蛋白芯片檢測食管癌的敏感性和特異性分別為89﹪和78﹪；檢測癌前輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生、原位癌的敏感性和特異性分別為92﹪和78﹪、94﹪和94﹪、93.8﹪和80﹪、95﹪和90﹪；檢測癌前病變總人群的敏感性和特異性分別為91.3﹪和76﹪。采用在癌前血清檢測中確定的陽性判斷標準對

4、高發(fā)區(qū)323例食管癌前血清和550例普查血清檢測結果顯示，該蛋白芯片檢測技術在兩種血清的檢測中對于中度和重度不典型增生以及原位癌檢測結果與內鏡加病理診斷的結果符合率均為100﹪，對于輕度不典型增生的符合率也達到95﹪以上；與細胞學結果比較，在細胞學診斷為重Ⅱ、重Ⅲ和癌的樣本中符合率為100﹪。 研究結論： 1.食管癌前病變相關抗原蛋白芯片檢測技術對于篩查食管癌前病變具有很高的敏感性和特異性，具有替代細胞學手段和食管內窺鏡