輸卵管積水影響體外受精-胚胎移植結(jié)局的機(jī)制研究.pdf

1、第一把部分，目的:
　　 探討兩種手術(shù)方式切除積水輸卵管對(duì)體外受精胚胎移植(invitrofertilizationandembryotransfer,IVF-ET)的影響。
　　 方法:
　　 選擇輸卵管因素不孕患者653例，分3組，其中125例病人因輸卵管積水在我院行抽芯法輸卵管切除，術(shù)前月經(jīng)第3天及術(shù)后第3個(gè)月經(jīng)周期第3天取空腹晨血，放射免疫法測(cè)定基礎(chǔ)促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2)，陰道超聲檢測(cè)雙側(cè)

2、卵巢體積和卵巢內(nèi)竇卵泡數(shù)目，再實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)降調(diào)方案IVF-ET;104例因異位妊娠或輸卵管積水，在本院或外院行傳統(tǒng)輸卵管切除法。月經(jīng)周期第3天取空腹晨血，放射免疫法測(cè)定基礎(chǔ)促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2)，陰道超聲檢測(cè)雙側(cè)卵巢體積和卵巢內(nèi)竇卵泡數(shù)目，再實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)降調(diào)方案IVF-ET;424例因慢性輸卵管炎或盆腔粘連，未行輸卵管切除，并排除男方不孕因素而實(shí)施IVF-ET治療。月經(jīng)周期第3天取空腹晨血，放射免疫法測(cè)定基礎(chǔ)促卵泡生成素(F

3、SH)、雌二醇(E2)，陰道超聲檢測(cè)雙側(cè)卵巢體積和卵巢內(nèi)竇卵泡數(shù)目。
　　 結(jié)果:
　　 1、手術(shù)后情況:125例行腹腔鏡下輸卵管抽芯切除術(shù)患者術(shù)后傷口均甲級(jí)愈合，無(wú)發(fā)熱、腹腔內(nèi)出血滲血、陰道排液等，復(fù)查陰道超聲附件區(qū)未見(jiàn)異常回聲，術(shù)后5～7d患者出院，術(shù)后2個(gè)月進(jìn)入IVF治療周期。
　　 2、手術(shù)后經(jīng)過(guò)比較三組病人之間卵巢儲(chǔ)備功能，發(fā)現(xiàn)抽芯組與未手術(shù)組竇卵泡數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.094)，而傳統(tǒng)手術(shù)組竇卵

4、泡數(shù)少于抽芯組和未手術(shù)組(均P＜0.05)。三組卵巢體積、基礎(chǔ)內(nèi)分泌FSH、LH分別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。
　　 3、行IVF-ET治療過(guò)程及治療后各種指標(biāo)及結(jié)局:
　　 (1)內(nèi)分泌激素水平比較:月經(jīng)周期第3天三組FSH、E2差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HCG注射日傳統(tǒng)手術(shù)組E2低于抽芯法組和未手術(shù)組（均P＜0.05），抽芯法組與未手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.659)。
　　

5、 (2)取卵數(shù)及Gn用量比較:抽芯法組與未手術(shù)組取卵數(shù)、Gn用量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.982，0.974)。傳統(tǒng)手術(shù)組取卵數(shù)少于抽芯法組和未手術(shù)組（均P＜0.05），使用Gn用量多于與抽芯法組和未手術(shù)組（均P＜0.05)。
　　 (3)臨床妊娠率比較:抽芯法組妊娠率為61.2％，傳統(tǒng)手術(shù)組為58.6％，未手術(shù)對(duì)照為56.2％，三者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.輸卵管積水會(huì)影響到IVF-E

6、T的妊娠結(jié)局，助孕治療前進(jìn)行合理的預(yù)處理會(huì)提高IVF-ET的助孕效果。
　　 2.相對(duì)于傳統(tǒng)的輸卵管切除術(shù)，腹腔鏡下抽芯法輸卵管切除術(shù)預(yù)處理擬實(shí)施IVF-ET的輸卵管積水患者，不影響卵巢儲(chǔ)備和卵巢刺激反應(yīng)性，且能提高臨床妊娠率，機(jī)制可能在于IVF-ET過(guò)程多個(gè)環(huán)節(jié)的改善，但其對(duì)卵巢功能的遠(yuǎn)期影響還需多中心、大樣本的前瞻性研究。
　　 第二部分，積水輸卵管液對(duì)早期人類胚胎的影響
　　 目的:
　　 探討不同

7、顏色積水輸卵管液體的生化組分、細(xì)胞因子和微生物檢測(cè)的差別及其對(duì)人類早期胚胎發(fā)育的影響。
　　 方法:
　　 選擇因輸卵管積水進(jìn)行腹腔鏡手術(shù)治療的患者33例，其中有色積液（輸卵管積液呈現(xiàn)為深淺不等的棕色或者紅色）者16例，無(wú)色積液（積水輸卵管液體為無(wú)色透明）者17例。腹腔鏡下確認(rèn)積水輸卵管后，以無(wú)菌穿刺針選擇管壁較薄的部位刺入輸卵管管壁內(nèi)，負(fù)壓抽吸輸卵管積液后分為3部分，1部分立即送檢進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)及衣原體抗原檢查，第2

8、部分進(jìn)行各種電解質(zhì)濃度及蛋白質(zhì)濃度、葡萄糖濃度等生化檢測(cè)，第3部分以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法行腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素-2(IL-2)檢測(cè)以及將人類3原核(3PN)胚胎放置于不同濃度的輸卵管積液進(jìn)行囊胚培養(yǎng)觀察其發(fā)育情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、兩組輸卵管積液中，無(wú)色積液中葡萄糖含量高于有色積液，其它化學(xué)組成及pH值、滲透壓等物理特性沒(méi)有差異(P＞0.05)，但兩組輸卵管積液與囊胚培養(yǎng)液相比，p

9、H值、碳酸氫根離子明顯升高(P＜0.05和P＜0.01)，鉀離子、鈣離子、鎂離子、葡萄糖顯著降低(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01)，輸卵管積液中未檢測(cè)到磷酸鹽，但在囊胚培養(yǎng)液中檢測(cè)到磷酸鹽值為0.26±0.03mmol/L，兩組輸卵管積液中pH值均明顯升高(P＜0.05)。
　　 2、對(duì)兩組輸卵管積液進(jìn)行ELISA檢測(cè)TNF-a和IL-2的濃度，發(fā)現(xiàn)有色積液中兩種細(xì)胞因子的水平明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均

10、P＜0.05)。
　　 3、對(duì)兩組輸卵管積液均進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)和衣原體抗原檢測(cè)結(jié)果:
　　 發(fā)現(xiàn)有色積液中衣原體抗原陽(yáng)性率為62.5％，無(wú)色液體中衣原體抗原陽(yáng)性率為70.6％，兩組比較沒(méi)有顯著性差異;所有輸卵管積液進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)后均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。
　　 4、3PN胚胎的囊胚培養(yǎng)結(jié)果
　　 將不同濃度的輸卵管積液進(jìn)行3PN胚胎囊胚培養(yǎng)后觀察不同顏色輸卵管積液中的囊胚形成情況，發(fā)現(xiàn)有色輸卵管積液及無(wú)色輸

11、卵管積液對(duì)3PN胚胎的囊胚形成率、囊胚孵出率及優(yōu)質(zhì)囊胚形成率均無(wú)顯著性差異((P＞0.05)。匯總所有不同濃度的輸卵管積液對(duì)3PN胚胎的囊胚培養(yǎng)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在低濃度輸卵管積液（輸卵管積液濃度50％以下）中，囊胚形成率、囊胚孵出率及優(yōu)質(zhì)囊胚率不受影響，但在高濃度的輸卵管積液中（輸卵管積液濃度75％），囊胚形成率、囊胚孵出率及優(yōu)質(zhì)囊胚率卻受到顯著影響，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、輸卵管積水與衣原體

12、感染有關(guān)，但對(duì)輸卵管積水患者是否應(yīng)用抗衣原體感染的藥物來(lái)改善IVF-ET結(jié)局值得探討。
　　 2、低濃度的輸卵管積液對(duì)胚胎的發(fā)育無(wú)不良影響，但高濃度的輸卵管積液影響明顯，這種影響可能與高濃度的積液缺乏胚胎發(fā)育所需的必要元素有關(guān)。
　　 3、不同顏色輸卵管積液TNF-a和IL-2含量不同，但輸卵管積液中異常的TNF-a和IL-2濃度似乎對(duì)胚胎發(fā)育沒(méi)有不良影響。
　　 第三部分，輸卵管積水對(duì)子宮內(nèi)膜的影響
　　

13、 目的:
　　 探討不同顏色積水輸卵管液體對(duì)子宮內(nèi)膜的影響。
　　 方法:
　　 1、輸卵管積水組:選擇161例因輸卵管積水行腹腔鏡手術(shù)治療的病人，術(shù)中同時(shí)行宮腔鏡檢查觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)。根據(jù)腹腔鏡手術(shù)中所見(jiàn)輸卵管積液的顏色，161例輸卵管積水病人中有19例為有色積液，142例為無(wú)色積液。對(duì)其中19例有色積液的病人和20例無(wú)色積液病人行子宮內(nèi)膜活檢備行顯微形態(tài)學(xué)觀察及炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-2檢測(cè)。

14、　　 2、非輸卵管積水組:110例因慢性輸卵管炎或盆腔粘連，無(wú)輸卵管積水證據(jù)，并排除男方不孕因素而擬實(shí)施IVF-ET治療，治療前行宮腔鏡檢查。其中30例病人行子宮內(nèi)膜活檢備行顯微形態(tài)學(xué)觀察及炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-2檢測(cè)。
　　 結(jié)果:
　　 1、對(duì)19例有色輸卵管積水、142例無(wú)色輸卵管積水及110例非輸卵管積水病人進(jìn)行了宮腔鏡檢查，總結(jié)了3組病人中宮腔鏡下子宮內(nèi)膜炎性表現(xiàn)的發(fā)生率分別為63.2％(12/19)

15、、22.5％(32/142)和20.9(23/110)，有色輸卵管積水病人宮腔鏡下子宮內(nèi)膜的炎性表現(xiàn)發(fā)生率明顯高于非輸卵管積水病人和無(wú)色積水組。
　　 2、對(duì)所有19例有色積水的病人和無(wú)色積水組中的20例病人以及非積水組中的30例病人行子宮內(nèi)膜活檢后按照宮腔鏡下炎性表現(xiàn)和正常表現(xiàn)分組，炎性表現(xiàn)組21例，正常表現(xiàn)組48例進(jìn)行蘇木素-伊紅染色、免疫組化及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-2在子

16、宮內(nèi)膜組織的表達(dá)。TNF-a免疫組化半定量分析提示:在有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中，TNF-a表達(dá)明顯高于沒(méi)有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織(P＜0.01);間質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)較弱，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中，IL-2表達(dá)明顯高于沒(méi)有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織(P＜0.01);間質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)較弱，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR檢測(cè)子宮內(nèi)膜TNF-a和IL-2結(jié)果表明，有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織

17、表達(dá)TNF-amRNA的水平高于沒(méi)有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜，分別為75.25±11.95和23.05±9.72，兩者比較有顯著性差異(p＜0.01)。有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織表達(dá)IL-2mRNA的水平高于沒(méi)有炎性表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜，分別為79.56±13.36和33.12±8.32，兩者比較有顯著性差異(p＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1、子宮內(nèi)膜炎與輸卵管積水有關(guān)，輸卵管積水誘發(fā)的子宮內(nèi)膜炎性反應(yīng)因人而異，有色輸卵管積液