BCL11A在髓系白血病中的臨床研究和致病機制的初步探討.pdf

1、[研究目的]髓系白血病是一種高異質性惡性血液病，具有復雜的遺傳學，形態(tài)學以及免疫表型特征。白血病的發(fā)病機理大都可歸于遺傳異常，例如染色體易位，DNA突變，基因表達異常等?，F(xiàn)今為適應日益復雜的疾病診斷和預后要求，新的分子標記是非常需要的。治療方法也能通過識別新的分子標記得到進一步的發(fā)展以實現(xiàn)顯著療效。B細胞白血病11A基因(BCL11A)最初發(fā)現(xiàn)于包含免疫球蛋白重鏈基因座的染色體易位，該基因座發(fā)現(xiàn)于人類B細胞非霍奇金淋巴瘤，并可通過逆轉錄

2、病毒插入到鼠白血病。該基因編碼一個Kruppel樣鋅指蛋白，該蛋白含有3個C2H2鋅指結構，一個富脯氨酸區(qū)域，和一個酸性結構域。BCL11A主要作為一個轉錄調控因子通過直接與一個富鳥嘌呤胞嘧啶(GC)區(qū)結合的DNA基序起作用。BCL11A主要在腦，造血細胞，免疫系統(tǒng)和睪丸表達，在發(fā)育過程中扮演重要角色。BCL11A異常與惡性腫瘤有關聯(lián)。鑒于BCL11A對血紅蛋白的表達調控的顯著升值，近來對BCL11A的研究吸引了越來越多的關注。包括我們

3、工作在內的已有研究已經(jīng)將BCL11A異常與多種惡性血液病相聯(lián)系。然而BCL11A在白血病的表達尚未被研究。我們希望借助QPCR絕對定量技術研究BCL11A在髓系白血病中的表達規(guī)律，為髓系白血病診斷和預后預測提供新的生物標記物。
　　[研究方法]收集292例急性髓系白血病(AML)和73例慢性髓系白血病(CML)患者骨髓，并以Ficoll法分離白血病細胞，而后提取它們的mRNA，并經(jīng)逆轉錄獲取cDNA。再以Taqman實時定量PCR

4、技術檢測BCL11A表達水平。結合樣本的亞型，年齡，性別等信息進行分析，歸納BCL11A表達水平與各種因素間的關系;以直接測序法檢測檢測這些樣本中幾種白血病常見的基因突變，分析這些基因突變與BCL11A異常表達之間的相關性;比較高表達BCL11A病人與低表達病人的預后情況，分析高表達BCL11A對預后的影響;采用構建穩(wěn)轉BCL11A細胞系的方法，比較這些細胞系在BCL11A表達水平升高前后的生存能力，抗凋亡能力以及骨髓分化能力的差別，以

5、探索BCL11A影響髓系白血病預后的細胞學致病機制;建立AML小鼠模型以進一步研究BCL11A對白血病病程發(fā)展的作用原理。
　　[研究結果]1）BCL11A在急性髓系白血病和慢性髓系白血病中均出現(xiàn)普遍高表達;2）在急性髓系白血病中，M0 BCL11A高表達比例最高(80％)，M3比例最小(27.9％)。BCL11A高表達與年齡，白細胞數(shù)和中間細胞遺傳學的風險呈正相關;3）在急性髓系白血病中，H-BCL11A與FLT3-ITD和DN

6、MT3A-R882突變正相關，與EVI1表達呈負相關，與NRAS突變無關;4）BCL11A的表達水平會隨著CML病程的發(fā)展，隨著從慢性期到急變期而升高;5）BCL11A表達水平可以作為獨立的AML病人的預后風險因子;6）BCL11A異常表達提高了白血病細胞系細胞的存活率并阻礙了骨髓分化;7）BXH2小鼠髓系白血病細胞系(B114，B140，B117)經(jīng)尾靜脈注射移植入BXH(F1)小鼠體內可以構建AML小鼠模型，為進一步研究BCL11A

7、對白血病病程發(fā)展的作用原理奠定基礎。
　　[結論]我們發(fā)現(xiàn)并第一次提出BCL11A在人類髓系白血病發(fā)生發(fā)展過程中的重要性。BCL11A作為一個癌基因，有可能在白血病中具有復雜的分子間相互作用。并證實BCL11A高表達是較差預后的獨立風險因子，尤其是對于中間細胞遺傳學風險患者。因此我們建議在診斷和檢測AML\CML病人時使用QPCR技術定量他們的BCL11A表達水平。我們的工作從臨床角度加深了對BCL11A生物學的理解，并將BCL1