RNA干擾抑制小鼠CCR3基因?qū)w內(nèi)外嗜酸性粒細胞影響的作用研究.pdf

1、分類號分類號：密級密級：UDC：學號學號：406521511268南昌大學碩士研究生學位論文RNA干擾抑制小鼠干擾抑制小鼠CCR3基因?qū)w內(nèi)外基因?qū)w內(nèi)外嗜酸性粒細胞影響的嗜酸性粒細胞影響的作用研究作用研究DetectionofeosinophilsexvivoinvivobysilencingmurineCCR3geneviaRNAinterference張皓培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第二附屬醫(yī)院指導教師姓名：劉月輝教授主任醫(yī)師專業(yè)

2、學位種類：醫(yī)學專業(yè)領域名稱：耳鼻咽喉頭頸外科學論文答辯日期：2014年5月答辯委員會主席：張劍評閱人：盲審2014年5月摘要II摘要目的：目的：RNAi干擾下調(diào)小鼠CCR3基因的表達，在體內(nèi)和體外觀察嗜酸性粒細胞（eosinophil，EOS）的變化情況，為闡明過敏性鼻炎的發(fā)生機制提供理論基礎。方法：方法：體外培養(yǎng)并純化小鼠來源的EOS，用細胞染色法進行細胞鑒定。通過磷酸鈣沉淀法，將體外合成的特異性CCR3shRNA重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染到

3、EOS中。用RTPCR和WesternBlot蛋白印跡法檢測慢病毒載體顆粒的抑制效果，AnnexinVFITC凋亡檢測法（(AnnexinVFITCApoptosisDetection）進行流式細胞計數(shù)檢測EOS凋亡情況。變應性鼻炎小鼠鼻腔局部分組注入慢病毒載體處理后，RTPCR和WesternBlot蛋白印跡法檢測各組小鼠的骨髓、外周血及鼻腔黏膜中EOS的CCR3基因mRNA及蛋白的表達變化情況。流式細胞表面抗原直接標記法檢測CD34

4、細胞的變化情況。結果：結果：（1）RTPCR和WesternBlot表明CCR3shRNA重組慢病毒處理的EOS的CCR3基因在mRNA和蛋白水平表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（p0.05）。（2）流式細胞凋亡術表明CCR3shRNA能夠抑制EOS生長并促進細胞凋亡，差異有統(tǒng)計學意義（p0.05）。（3）在小鼠骨髓、外周血、鼻腔黏膜中，CCR3shRNA處理組的CCR3基因的mRNA及蛋白表達低于PBS治療對照及shRNA治療對照組，差異有

5、統(tǒng)計學意義（p0.05）。（4）CCR3shRNA處理組的CD34細胞數(shù)與PBS對照及shRNA治療組相比較差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。結論：結論：RNAi干擾下調(diào)基因CCR3的表達，在細胞培養(yǎng)和變應性鼻炎動物模型中能有效的影響CCR3基因mRNA和蛋白水平的表達，同時能促進EOS凋亡。小鼠體內(nèi)注入CCR3shRNA重組慢病毒能有效抑制EOS在局部組織的遷移及浸潤。關鍵詞：關鍵詞：嗜酸性粒細胞；CCR3；RNA干擾；細胞凋亡；CD