DIDS對酒精所致大鼠胃粘膜損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：酒精是常見的外源性胃粘膜損傷因素，酒精誘發(fā)的大鼠胃粘膜損傷是研究胃粘膜損傷及胃粘膜保護機制的經(jīng)典模型。多年來，關于胃粘膜損傷的研究主要集中在如何削減酒精、阿司匹林和胃酸等損傷因素對胃粘膜的損害作用和如何加強內源性前列腺素等胃粘膜的保護機制上。本實驗采用酒精誘發(fā)大鼠急性胃粘膜損傷模型，研究具有抗氧化和抗凋亡作用的陰離子交換蛋白2(AE2)抑制劑DIDS對胃酸分泌的影響和對胃粘膜損傷的保護作用，探討其可能的作用機制，為開發(fā)新型抗胃粘膜

2、損傷藥物提供實驗依據(jù)。 方法：通過測定大鼠基礎胃酸分泌和組胺刺激性胃酸分泌，研究DIDS對大鼠基礎胃酸分泌和組胺刺激性胃酸分泌的影響。實驗動物隨機分為實驗組和對照組(每組5-7只)?；A胃酸分泌測定：大鼠烏拉坦(1.25g/Kg)腹腔注射麻醉，上腹部小切口，在盡可能不損傷胃的情況下結扎大鼠胃幽門和食管胃連接部，絲線縫合關腹。1小時后再次開腹，切取完整的胃，胃內容物用濃度為0.1N的NaOH滴定，測定胃內容物的酸堿當量，間接計算出

3、胃酸分泌量。實驗組的DIDS(50mg/Kg)在幽門和胃食管連接部結扎前5分鐘靜脈注射，對照組注射等量生理鹽水。組胺刺激性胃酸分泌測定：組胺(5mg/Kg)大鼠皮下注射15分鐘后，大鼠烏拉坦麻醉，開腹，在幽門和胃食管連接部結扎后取胃，用0.1N的NaOH滴定胃內容物，計算胃酸分泌量。實驗組的DIDS(50mg/Kg)在皮下注射組胺前5分鐘靜脈注射，對照組注射等量生理鹽水。用1ml無水酒精灌胃誘導大鼠急性胃粘膜損傷模型。DIDS預處理組在

4、酒精灌胃前5分鐘予以DIDS(50mg/Kg)靜脈注射。灌胃1小時后開腹取胃，胃內容物測定胃酸含量。胃粘膜組織進行大體觀察。部分胃組織用4％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，切片HE染色后光鏡下觀察，并進行COX-2免疫組織化學檢查。一部分胃組織用2.5％戊二醛固定，超薄切片做透射電鏡檢查。其余部分胃組織-70℃保存，測定胃粘膜的MPO活性和MDA水平，并用酶聯(lián)免疫吸附法檢測PGE2水平。 結果：DIDS明顯抑制大鼠組胺刺激性胃酸分泌

5、，但對大鼠基礎胃酸分泌沒有明顯影響。無水酒精灌胃引起大鼠胃酸分泌的輕度增加和明顯的胃粘膜損傷，損傷包括粘膜出血、粘膜上皮剝脫、腺體損傷和中性粒細胞浸潤等。損傷的胃粘膜組織中MPO活性和MDA水平明顯升高，COX-2表達增加，而PGE2水平反而下降。在大體、光鏡和電鏡下觀察，DIDS預處理明顯減輕胃粘膜的損傷程度，胃粘膜上皮剝脫明顯減輕，中性粒細胞和嗜酸性粒細胞浸潤明顯減少，粘膜出血范圍變得局限。DIDS抑制酒精引起的胃酸分泌并且逆轉MP