茯苓優(yōu)良菌種的選育、保藏和液體發(fā)酵的研究.pdf

1、　　本文研究以茯苓馬鈴薯斜面菌種P0為出發(fā)菌株，經(jīng)紫外線誘變，以差別殺菌法和菌絲過(guò)濾法富集營(yíng)養(yǎng)缺陷型。在含有2mg/mL茯苓胞外多糖的濃度梯度完全培養(yǎng)基平板上，挑選生長(zhǎng)較好的耐較高濃度茯苓胞外多糖的茯苓菌株，接種到不同茯苓胞外多糖濃度差的完全培養(yǎng)基平板上逐級(jí)篩選，成功獲得了遺傳穩(wěn)定的高產(chǎn)突變株P(guān)6。P6搖瓶發(fā)酵后，每升發(fā)酵液中菌絲體干重達(dá)11.92g，較出發(fā)菌株P(guān)0提高了7.58％。在茯苓優(yōu)良菌種選育的研究中，首次用紫外線進(jìn)行誘變育種，

2、并構(gòu)建了茯苓優(yōu)良菌株的篩選模型，從而提高了優(yōu)良菌株的篩選效率。通過(guò)搖瓶液體發(fā)酵和平板培養(yǎng)，考察了甘油菌種保藏法、凍干菌種保藏法和斜面菌種保藏法的保藏效果，結(jié)果表明三種菌種保藏法對(duì)茯苓菌種的保藏效果均較理想。通過(guò)茯苓的搖瓶液體發(fā)酵培養(yǎng)，確定了茯苓液體發(fā)酵的最適發(fā)酵培養(yǎng)基和最適培養(yǎng)條件，并進(jìn)一步確定了最佳的放大培養(yǎng)工藝。在葡萄糖總濃度為4％的情況下，發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵培養(yǎng)第60h和第72h，分別以1％的濃度補(bǔ)糖效果最佳。在發(fā)酵罐液體發(fā)酵中使用了連續(xù)

3、滴加補(bǔ)料培養(yǎng)的技術(shù)，提高了發(fā)酵罐的液體發(fā)酵水平，與搖瓶液體發(fā)酵相比，發(fā)酵罐液體發(fā)酵不僅使發(fā)酵時(shí)間從168h縮短為120h，而且還使菌絲干重從10.74g/L增加到11.95g/L，提高了其菌體產(chǎn)量達(dá)11.27％。對(duì)發(fā)酵液中胞外多糖進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)每升茯苓發(fā)酵液中茯苓胞外多糖的量5.43g高于胞內(nèi)總多糖的量4.09g。商品藥材茯苓多糖的平均含量87.24％遠(yuǎn)高于發(fā)酵茯苓菌絲體多糖的平均含量45.17％；發(fā)酵茯苓菌絲體中有較強(qiáng)生理活性的水溶