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文檔簡介
1、ZFP(Zinc Finger Proteins)轉錄因子是植物中的一大類重要轉錄調控子,主要在植物生長發(fā)育、抗逆境脅迫等方面具有重要的作用。本研究從檉柳轉錄組數(shù)據(jù)中鑒定出一條鹽脅迫響應的鋅指蛋白基因,命名為ThZFP3,該基因全長1335bp,編碼444氨基酸,屬于CCCH型鋅指蛋白基因家族,編碼蛋白相對分子質量48491.6Da,理論等電點(PI)為8.08。構建植物表達載體pBI121-GFP-ThZFP3,利用基因槍技術瞬時轉化
2、洋蔥表皮研究亞細胞定位,結果表明ThZFP3蛋白定位在細胞核中。
利用酵母雙雜交技術鑒定ThZFP3轉錄激活結構域,確定其轉錄激活區(qū)位于C端的225~280氨基酸區(qū)段。
利用實時熒光定量RT-PCR技術分析顯示,該基因受高鹽、干旱誘導上調表達,暗示ThZFP3可能在檉柳抗旱耐鹽過程中發(fā)揮重要作用。構建ThZFP3基因的過表達載體,轉化擬南芥,獲得T3代轉基因株系。對野生型和轉基因株系擬南芥進行NaCl和Mannito
3、l脅迫處理,脅迫條件下轉基因株系的萌發(fā)率、根長、鮮重及長勢都優(yōu)于野生型株系,表明ThZFP3基因能提高轉基因擬南芥的耐鹽性和耐旱性。
構建RNAi載體pFGC5941-ThZFP3,利用瞬時轉化技術將農(nóng)桿菌pROKⅡ-ThZFP3、pFGC5941-ThZFP3和pROKⅡ轉入檉柳,獲得過表達(OE)、抑制表達(RNAi)和對照(Control)轉基因植株,分析三種轉基因植株在NaCl和Mannitol脅迫下的抗逆能力。DAB
4、、NBT和Evans blue組織化學染色結果顯示,過表達植株(OE)細胞內(nèi)的O2-和H2O2含量明顯低于比Control和RNAi植株,說明過表達株系受脅迫后細胞膜結構較為完整,受損傷程度低,而抑制表達株系細胞受損傷程度最嚴重。測定三種轉基因植株的失水率、葉綠素含量、PRO含量、H2O2含量、MDA含量、POD和SOD活性等生理指標,結果顯示過表達植株(OE)的失水率、ROS含量和MDA含量相對最低,葉綠素含量、PRO含量、POD活性
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