牛蒡寡糖的修飾及其生物活性研究.pdf

1、近年來研究發(fā)現(xiàn)，糖類化合物具有增強機體免疫力、抗腫瘤、抗輻射、抗病毒等多種生物活性，有望成為人類戰(zhàn)勝疾病的重要藥物。加強糖類藥物的資源開發(fā)，尋找高效低毒的糖類藥物或通過改造已知糖類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)以其提高生物活性，已成為國內(nèi)外研究的熱點課題。牛蒡寡糖是從藥用植物牛蒡根中分離得到的一種聚合度為13的果寡糖。已有研究發(fā)現(xiàn)牛蒡寡糖具有顯著促進雙歧桿菌的生長、抗腫瘤、增強機體免疫力等生物活性，還可作為食品和飼料的添加劑或天然藥物。
　　 本研

2、究以新鮮的牛蒡根為原料，分離得到牛蒡寡糖粗品，得率20.58％；經(jīng)純化得到牛蒡寡糖純品，得率為85.12％，寡糖含量為98％。采用高效凝膠滲透色譜、紅外吸收光譜、核磁共振等檢測手段對牛蒡寡糖純品進行了鑒定，確定所得寡糖為文獻報道的牛蒡寡糖。
　　 本實驗采用乙?；土蛩峄瘍煞N化學修飾方法對牛蒡寡糖進行了結(jié)構(gòu)修飾，通過紅外吸收光譜、核磁共振等檢測手段鑒定牛蒡寡糖結(jié)構(gòu)中存在乙?；土蛩峄Ｒ阴；揎椧源姿狒麨橐阴；噭x擇冰醋酸為

3、反應(yīng)溶劑，濃度為50％的NaOH溶液為催化劑，通過改變物料比及其它反應(yīng)條件成功制備得到牛蒡寡糖醋酸酯衍生物，取代度分別為0.53、0.72、0.94、1.47，產(chǎn)率分別為47.2％、54.7％、58.4％、65.8％。硫酸化修飾采用了三氧化硫-吡啶法和氯磺酸-吡啶法兩種方法，同時探討了不同反應(yīng)溶劑、投料比、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間對牛蒡寡糖硫酸酯取代度的影響，通過對比分析確定了最佳反應(yīng)條件，即以三氧化硫-吡啶復合物為硫酸化試劑，以二甲基甲酰胺

4、為反應(yīng)試劑，以40℃為基本反應(yīng)溫度，以2 h為最佳反應(yīng)時間。在最佳反應(yīng)條件的基礎(chǔ)上，成功制備得到取代度分別為0.42、0.73、1.25、1.45的牛蒡寡糖硫酸酯衍生物。
　　 生物活性方面，對不同取代度和取代基的牛蒡寡糖衍生物進行了促雙歧桿菌生長及調(diào)節(jié)機體免疫活性的研究。在促雙歧桿菌生長的活性測定中，取代度DS＜1的牛蒡寡糖醋酸酯和牛蒡寡糖硫酸酯衍生物作為碳源添加物時，雙歧桿菌體外培養(yǎng)增殖效果明顯，且濃度為1.0 mg/mL左

5、右時菌數(shù)達到最大值；當DS﹥1時，雙歧桿菌體外培養(yǎng)增殖效果不明顯，甚至下降。在促進免疫細胞增殖的活性測定中，所有取代度的牛蒡寡糖衍生物都能提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅的能力，取代度為0.72、0.94的牛蒡寡糖醋酸酯和取代度為0.42、0.73的牛蒡寡糖硫酸酯活性提高顯著，且都在濃度250 μg/mL達到最大值；取代度為0.72的牛蒡寡糖醋酸酯和取代度為0.42、0.73的牛蒡寡糖硫酸酯能夠顯著的促進脾淋巴細胞的增殖，前者在濃度250