mtDNA4977bp缺失預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞放射敏感性的體外研究.pdf

1、目的： 研究不同單次劑量X射線照射前列腺癌細(xì)胞(PC-3)、肝癌細(xì)胞(HepG2)和食管癌細(xì)胞(EC-9706)所誘導(dǎo)的mtDNA4977bp缺失，比較經(jīng)照射后細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)，探討mtDNA4977bp缺失用于腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測(cè)的可行性。 方法： 利用不同劑量的X射線對(duì)體外培養(yǎng)的前列腺癌細(xì)胞(PC-3)、肝癌細(xì)胞(HepG2)和食管癌細(xì)胞(EC-9706)進(jìn)行照射。(1)照射后用改進(jìn)高鹽沉淀法提取細(xì)胞線粒體基

2、因；應(yīng)用普通PCR方法擴(kuò)增內(nèi)參片段，應(yīng)用巢式PCR方法擴(kuò)增發(fā)生mtDNA4977bp缺失的片段；PCR產(chǎn)物凝膠電泳并采集圖像，用mtDNA4977bp缺失片段的灰度值與mtDNA內(nèi)參片段的灰度值之比代表每個(gè)照射劑量總體線粒體模板中存在mtDNA4977bp缺失所占的相對(duì)比例。(2)應(yīng)用MTT比色法測(cè)定照射后細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)。(3)根據(jù)存活分?jǐn)?shù)擬合腫瘤細(xì)胞的劑量存活曲線；應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較三種腫瘤細(xì)胞經(jīng)不同劑量照射誘

3、導(dǎo)的mtDNA4977bp缺失率；比較mtDNA4977bp缺失檢出率與細(xì)胞存活率之間的關(guān)系。 結(jié)果： 1、提取三種腫瘤細(xì)胞mtDNA樣品，在稍大于15000bp處出現(xiàn)亮度不等的條帶，與mtDNA理論值(16569bp)的位置一致； 2、X線照射后腫瘤細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)，隨著照射劑量的增大而減小，小劑量階段(0Gy、1Gy、2Gy)細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)下降幅度較小，存活分?jǐn)?shù)均在50％以上；較大劑量階段，尤其是8Gy照射后細(xì)胞

4、存活很少，在同一劑量HepG2的存活分?jǐn)?shù)最低，PC-3最高，EC-9706介于二者之間。 3、普通PCR擴(kuò)增的mtDNA內(nèi)參片段和巢式PCR擴(kuò)增的mtDNA4977bp缺失片段與理論預(yù)計(jì)位置一致。隨著照射劑量的增加，三種腫瘤細(xì)胞由放射誘導(dǎo)的mtDNA4977bp缺失有所增加；1Gy和2Gy照射后三種腫瘤細(xì)胞的mtDNA4977bp缺失率在統(tǒng)計(jì)上無(wú)顯著性差異；40y照射后PC-3分別與HepG2、EC-9706之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，

5、HepG2和EC-9706之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；8Gy照射后HepG2和EC-9706的缺失率仍在增加，而PC-3的缺失率下降，PC-3的輻射誘導(dǎo)缺失率低于另外兩種細(xì)胞，但HepG2和EC-9706的缺失率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4、mtDNA4977bp缺失的檢出率與MTT法測(cè)定的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)具有一致性。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)測(cè)定三種腫瘤細(xì)胞經(jīng)X線照射后的存活分?jǐn)?shù)，比較其放射敏感性，同時(shí)應(yīng)用巢式PCR擴(kuò)增由照射引起mtDNA49

6、77bp缺失的基因片段，發(fā)現(xiàn)其mtDNA4977bp缺失與放射敏感性的關(guān)系，得出結(jié)論如下： 1.MTT法測(cè)定的三種腫瘤細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)，擬合曲線符合細(xì)胞多靶單擊模型的細(xì)胞生存曲線一般特征，得出HepG2具有較高的輻射敏感性，PC-3輻射敏感性相對(duì)最低，EC-9706輻射敏感性介于二者之間。 2.電離輻射誘導(dǎo)能夠出mtDNA4977bp缺失，并與照射劑量呈正相關(guān)。得出HepG2和EC-9706較PC-3更敏感，HepG2和E