氧自由基、鈣離子在心肌細(xì)胞凋亡中的作用及?；撬?、胺腆酮、鉀通道開放劑等的影響研究.pdf

1、目的：該課題以探討細(xì)胞凋亡在心肌缺血-再灌注損傷和氧化應(yīng)激中的作用,以及采用拮抗自由基和鈣超載的藥物或措施抑制心肌細(xì)胞凋亡的可能性和意義.結(jié)論：1.細(xì)胞凋亡的檢測(cè)需多種方法相結(jié)合,其中AnnexinV-FITC染色法可識(shí)別出凋亡早期的細(xì)胞（2-3h）,而且能夠區(qū)別細(xì)胞凋亡與壞死,有較高的特異性和靈敏性,是目前較理想的凋亡檢測(cè)方法.2.培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞缺氧2h-復(fù)氧6h后,除出現(xiàn)壞死指標(biāo)外,TUNEL呈現(xiàn)陽(yáng)性染色,透射電鏡發(fā)現(xiàn)典型的

2、凋亡細(xì)胞,流式細(xì)胞儀PI染色法出現(xiàn)明確的亞二倍體峰,Bax表達(dá)明顯增強(qiáng).3.培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在單純?nèi)毖?h組和單純?nèi)毖?8h+換液組,TUNEL檢測(cè)、流式細(xì)胞儀、透射電鏡皆未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性凋亡指標(biāo),說明單純?nèi)毖跷凑T導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡.4.心肌缺血-再灌注在出現(xiàn)細(xì)胞凋亡的同時(shí),伴有顯著的MDA含量升高,提示氧自由基可能是缺血-再灌注致心肌細(xì)胞凋亡的始動(dòng)和關(guān)鍵性介質(zhì).5.流式細(xì)胞儀PI染色法呈現(xiàn)典型的亞二倍體峰,流式細(xì)胞儀雙標(biāo)法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)較多Annexi

3、n V<'+>PI<'->的凋亡細(xì)胞.高濃度過氧化氫（1mmol/L）則主要致使細(xì)胞壞死.因此,外源性羥自由基可劑量依賴性地誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡或壞死.6.Caspase-3（CPP32）的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑Z-DEVD-FMK可對(duì)抗過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,表明Caspase-3途徑可能是OH-誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路之一.7.IPC使大鼠心肌I-R模型的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少,同時(shí)Bax蛋白表達(dá)降低,說明IPC可減輕心肌細(xì)胞凋亡.8

4、.大鼠心臟IPC后,心肌SOD活性增加,MDA含量顯著下降;吡那地爾也減少培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧后MDA的產(chǎn)生.提示抑制氧自由基介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能是IPC及鉀通道開放劑心肌保護(hù)作用的重要機(jī)制.9.單純IPC（缺血5min-再灌注10min,共重復(fù)3次,不進(jìn)行后續(xù)的長(zhǎng)時(shí)間心肌I-R）后6.5取心肌標(biāo)本,TUNEL法檢測(cè)陽(yáng)性,說明出現(xiàn)了心肌細(xì)胞凋亡.提示IPC在誘導(dǎo)內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的同時(shí),可能與啟動(dòng)了機(jī)體的凋亡機(jī)制,使最脆弱的部分細(xì)胞發(fā)生凋亡

5、;這有可能參與IPC的延遲保護(hù)作用.10.?；撬岷桶诽笸墒闺x體心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧、過氧化氫處理及在體心肌I-R的心肌損害程度減輕,并伴有MDA含量降低,表明牛磺酸及胺腆酮具有抗氧化活性;11.大體模型發(fā)現(xiàn)阿斯匹林組6-keto-PGF<,1α>水平明顯低于I-R組,而血漿CPK水平、心肌梗死范圍及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)與I-R組相似,表明阿斯匹林并未明顯減輕心肌I-R損傷.12.單個(gè)心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧或受過氧化氫作用后即刻,細(xì)胞內(nèi)鈣熒光強(qiáng)