地塞米松、辛伐他汀對小鼠成骨細胞特異性轉錄因子和細胞增殖作用的影響.pdf

1、第一部分 地塞米松對小鼠骨髓來源的成骨細胞核心結合因子β蛋白表達的影響 通過Western blot實驗分析地塞米松對骨髓來源的成骨細胞核心結合因子β蛋白表達的影響,探討骨髓基質干細胞體外向成骨細胞定向分化的機制.方法:取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基質細胞進行原代和傳代培養(yǎng),在細胞培養(yǎng)同時間點加入10<'-8>M地塞米松(實驗組)或保持基礎培養(yǎng)條件(對照組).于不同時間點提取細胞核基質蛋白后,應用Western blot實驗分析地塞米松

2、對骨髓來源的成骨細胞核心結合因子β蛋白的表達.通過其表達觀察地塞米松對上述成骨細胞轉錄因子的的影響.結論:10<'-8>mol/L地塞米松促進小鼠骨髓基質細胞向成骨細胞分化,而這種促分化作用可能與提高促成骨細胞分化的轉錄因子水平有關.第二部分 辛伐他汀對小鼠骨髓來源的成骨細胞增殖的影響 通過觀察培養(yǎng)的骨髓基質干細胞形態(tài)和細胞增殖實驗來分析辛伐他汀對骨髓來源的成骨細胞形態(tài)及分裂增殖的影響.方法:培養(yǎng)細胞分為實驗組(培養(yǎng)基中含地塞米松10<

3、'-8>mol/L和辛伐他汀濃度分別為10<'-5>、10<'-6>、10<'-7>mol/L)和對照組(培養(yǎng)基中含地塞米松10<'-8>mol/L和配制辛伐他汀溶液的對照液).原代培養(yǎng)小鼠骨髓基質細胞于標準培養(yǎng)基中(不含地塞米松),第5天細胞傳代.傳代細胞按2000個細胞/孔接種于96孔培養(yǎng)板中,于傳代培養(yǎng)當日分別加入含辛伐他汀10<'-5>、10<'-6>、10<'-7>mol/L的培養(yǎng)基,各組分別以加地塞米松為對照組.采用Cell

4、Titer96試劑盒(Promega)以2日為間隔分別測定各試驗組與對照組中每孔細胞數.結論:辛伐他汀具有抑制骨髓基質干細胞體外增生并促進細胞外基質礦化的作用,而且這種作用具有濃度的依賴性.第三部分 地塞米松、辛伐他汀對小鼠骨髓來源的成骨細胞Ⅰ型膠原蛋白表達的影響 通過基因轉染的方法分析地塞米松、辛伐他汀對小鼠成骨細胞Ⅰ型膠原蛋白的表達的影響以及確認培養(yǎng)的成骨細胞的分化階段.方法:取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基質細胞加入10<'-8>m