應(yīng)用PCR-SSCP銀染檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤中LGI1基因突變.pdf

1、研究背景Chernova等人于1998年從膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系T98G染色體10q24區(qū)域分離出一個(gè)新的基因，該基因在多型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中雜合性缺失(LOH)高達(dá)80％以上，它編碼一種富含亮氨酸重復(fù)序列(LRRs)的蛋白質(zhì)。初步研究提示，該基因在神經(jīng)組織中能高度特異性的表達(dá)，在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中表達(dá)降低，在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)明顯降低，甚至消失，具有腫瘤抑制基因的特性，故將其命名為富亮氨酸膠質(zhì)瘤失活基因1(Leucinerichgene-Gli

2、omaInactivated1，LGI1)。該基因是繼PTEN后新近才發(fā)現(xiàn)的候選的抑癌基因，關(guān)于該基因的研究尚未成為熱點(diǎn)，目前多數(shù)研究與顳葉癲癇的發(fā)病有關(guān)，與腦腫瘤有關(guān)的研究相對(duì)較少，該基因的生物學(xué)作用機(jī)制尚不明確。國(guó)內(nèi)未見該基因的研究報(bào)告。 目的為了檢測(cè)人腦膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LGI1基因編碼區(qū)中有無(wú)堿基突變，并探討LGI1基因突變?cè)谀z質(zhì)瘤發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程所起的作用。 材料與方法收集12例天津市環(huán)湖醫(yī)院、天津市第一中

3、心醫(yī)院手術(shù)切除的新鮮膠質(zhì)瘤標(biāo)本，1例正常腦組織標(biāo)本；體外培養(yǎng)TJ905、SK-N-SH、A172、U251、H45種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。提取組織標(biāo)本及培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA。設(shè)計(jì)特異性引物分別擴(kuò)增LGI1各外顯予序列，采用SSCP銀染分析，發(fā)現(xiàn)異常泳動(dòng)條帶進(jìn)行DNA序列分析。 結(jié)果1、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)證實(shí)在膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本、細(xì)胞系及正常腦組織均克隆出完整的與預(yù)期片段一致的LGI1外顯子序列。 2、瓊脂糖凝膠電泳未檢測(cè)到膠質(zhì)瘤細(xì)

4、胞系SK-N-SH第1外顯子處擴(kuò)增產(chǎn)物，推測(cè)其在此處發(fā)生了基因缺失。 3、未在12例膠質(zhì)瘤標(biāo)本中檢測(cè)到SSCP銀染異常條帶。 4、在細(xì)胞系TJ905第5外顯子處檢測(cè)到電泳條帶異常，經(jīng)DNA測(cè)序分析證實(shí)確有突變，突變位點(diǎn)位于第5外顯子的第7(TCT→TCC)、第9(GAC→AAC)、第10(CTC→CCC)、第13(GAT→AAT)以及第18(CTG→CGG)密碼子。 結(jié)論未在腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)LGI1基因編碼區(qū)突